Ici, nous décrivons une méthode de transduction des lymphocytes T humains avec de la luciférase pour faciliter le suivi in vivo du trafic de lymphocytes T induit par les anticorps bispécifiques vers les tumeurs dans des études visant à évaluer l’efficacité antitumorale et le mécanisme des anticorps bispécifiques engageant les lymphocytes T.
Un abonnement JoVE est requis pour visualiser ce contenu. Connectez-vous ou commencez votre période d'essai gratuite.
Article de méthode
Suivi du trafic de lymphocytes T induits par des anticorps bispécifiques à l’aide de lymphocytes T humains transduits par la luciférase
Dans cet article
Résumé
Résumé
Les anticorps bispécifiques engageant les lymphocytes T (T-BsAbs) sont à différents stades de développement préclinique et d’essais cliniques pour les tumeurs solides. Des facteurs tels que la valence, l’arrangement spatial, la distance interdomaine et les mutations Fc affectent l’efficacité antitumorale de ces thérapies, généralement en influençant le ralliement des lymphocytes T aux tumeurs, ce qui reste un défi majeur. Ici, nous décrivons une méthode pour transduire les cellules T humaines activées avec la luciférase, permettant le suivi in vivo des cellules T pendant les études de thérapie T-BsAb. La capacité des T-BsAbs à rediriger les cellules T vers les tumeurs peut être évaluée quantitativement à plusieurs moments du traitement, ce qui permet aux chercheurs de corréler l’efficacité antitumorale des T-BsAbs et d’autres interventions avec la persistance des cellules T dans les tumeurs. Cette méthode atténue la nécessité de sacrifier des animaux pendant le traitement pour évaluer histologiquement l’infiltration des lymphocytes T et peut être répétée à plusieurs moments pour déterminer la cinétique du trafic des lymphocytes T pendant et après le traitement.
Introduction
Les anticorps bispécifiques engageant les lymphocytes T (T-BsAbs) sont des anticorps modifiés utilisés pour fournir une spécificité artificielle aux lymphocytes T polyclonaux en engageant les lymphocytes T par un bras de liaison et un antigène tumoral par un autre bras de liaison. Cette technologie a été appliquée avec succès aux cancers hématologiques (blinatumomab1 ciblant CD19), et de nombreux T-BsAbs sont en développement préclinique et clinique pour une variété de tumeurs solides ainsi que2. Les T-BsAbs engagent les lymphocytes T polyclonaux d’une manière indépendante du complexe majeur d’histocompatibilité (CMH) et....
Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.
Protocole
Les procédures suivantes ont été évaluées et approuvées par le Comité institutionnel de soin et d’utilisation des animaux du Memorial Sloan Kettering.
1. Transfection de cellules 293T avec luciférase et récolte de surnageant viral
- Culture de cellules 293T
- Préparer les milieux en ajoutant ce qui suit à un litre de DMEM chacun : 110 mL de sérum fœtal bovin inactivé par la chaleur (FBS), 11 mL de pénicilline-streptomycine.
- Décongeler 5 cellules x 106 293T et les transférer dans une fiole T175 avec le milieu préparé comme décrit ci-dessus.
- Divisez les cellules 293T 1:10 tous les....
Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.
Résultats
Comme décrit à l’étape 4.3, les souris peuvent être orientées dans différentes positions pendant l’imagerie pour évaluer la présence de lymphocytes T dans différents tissus. Le positionnement en décubitus dorsal permet d’évaluer les lymphocytes T dans les poumons, ce qui est courant aux premiers moments après l’injection. Le positionnement latéral avec la xénogreffe sous-cutanée tournée vers le haut est utilisé pour évaluer au mieux le trafic des lymphocytes T vers la tumeur. Des souris femelles C.Cg-Rag2 tm1Fwa Il2r.......
Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.
Discussion
Alors que le blinatumomab T-BsAb a été approuvé pour les hémopathies malignes CD19 positives, la mise en œuvre réussie des T-BsAbs dans les tumeurs solides s’est avérée beaucoup plus difficile. Le catumaxomab, un T-BsAb dirigé contre la molécule d’adhésion des cellules épithéliales (EPCAM), a été approuvé pour le traitement de l’ascite maligne chez les patientes atteintes d’un cancer de l’ovaire, mais la production du médicament a ensuite été arrêtée pour des raisons commerciales19. Aucun autre T-.......
Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.
Déclarations de divulgation
NKC déclare avoir reçu des subventions de recherche commerciale de Y-mAbs Therapeutics. NKC est l’inventeur et le propriétaire des brevets délivrés sous licence par MSK à Y-mAbs Therapeutics, Biotec Pharmacon/Lallemand et Abpro-labs. MSK et NKC ont des intérêts financiers dans Y-mAbs. NKC déclare avoir reçu des options d’achat d’actions d’Eureka Therapeutics. HFG et MEC n’ont pas de divulgations pertinentes.
Remerciements
Les auteurs aimeraient remercier le Dr Vladimir Ponomarev d’avoir partagé les constructions de luciférase utilisées dans les expériences décrites dans la section des résultats représentatifs de cet article.
....Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.
Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| 293Cellules | T ATCC | CRL-11268 | |
| BSA | Sigma Aldrich | A7030-10G | |
| CD3/CD28 billes | Gibco (ThermoFisher) | 11161D | |
| D-Luciférine, Sel de potassium | Goldbio | LUCK-1G | |
| DMEM | Gibco (ThermoFisher) | 11965092 | |
| ADN réactif de transfection in vitro (polyjet) | SignaGen Laboratories | SL100688 | |
| EDTA | Sigma Aldrich | E9884-100G | |
| FBS | Gibco (ThermoFisher) | 10437028 | |
| Plasmide Gag/pol | Addgene | 14887 | |
| Plasmide GFP | Addgene | 11150-DNA.cg | |
| Péniciline-Streptomycine | Gibco (ThermoFisher) | 15140122 | |
| IL-2 humaine recombinante | R& D Systems | 202-IL-010/CF | |
| Rétronectine | Takara | T100B | |
| Trypsine | Gibco (ThermoFisher) | 25-300-120 | |
| VSV-G plasmide | Addgene | 8454 |
Références
- Gökbuget, N., et al. Blinatumomab for minimal residual disease in adults with B-cell precursor acute lymphoblastic leukemia. Blood. 131 (14), 1522-1531 (2018).
- Runcie, K., Budman, D. R., John, V., Seetharamu, N. Bi-speci....
Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.
Réimpressions et autorisations
