Essai de vide en temps réel

Summary

Cet article décrit une nouvelle méthode pour étudier le comportement de vidange de la souris en incorporant la surveillance vidéo dans le test conventionnel de la tache vide. Cette approche fournit des informations temporelles, spatiales et volumétriques sur les événements de miction et les détails du comportement de la souris pendant les phases claires et sombres de la journée.

Abstract

Le comportement normal de miction est le résultat de la fonction coordonnée de la vessie, de l’urètre et des sphincters urétraux sous le contrôle approprié du système nerveux. Pour étudier le comportement de miction volontaire dans des modèles murins, les chercheurs ont mis au point le test de la tache vide (VSA), une méthode qui mesure le nombre et la surface des taches d’urine déposées sur un papier filtre tapissant le sol de la cage d’un animal. Bien que techniquement simple et peu coûteux, ce test présente des limites lorsqu’il est utilisé comme test final, notamment un manque de résolution temporelle des événements de miction et des difficultés à quantifier les taches d’urine qui se chevauchent. Pour surmonter ces limitations, nous avons développé un VSA vidéo-surveillé, que nous appelons VSA en temps réel (RT-VSA), et qui nous permet de déterminer la fréquence de vidage, d’évaluer le volume vidé et les modèles de vidage, et d’effectuer des mesures sur des fenêtres temporelles de 6 heures pendant les phases sombres et claires de la journée. La méthode décrite dans ce rapport peut être appliquée à une grande variété d’études sur souris qui explorent les aspects physiologiques et neurocomportementaux de la miction volontaire dans les états de santé et de maladie.

Introduction

Le stockage de l’urine et la miction sont coordonnés par un circuit central (système nerveux central) qui reçoit des informations sur l’état de remplissage de la vessie par les nerfs pelviens et hypogastriques. L’urothélium, l’épithélium qui tapisse les voies urinaires du bassinet du rein à l’urètre proximal, forme une barrière étroite contre les déchets métaboliques et les agents pathogènes présents dans l’urine. Il fait partie intégrante d’un réseau sensoriel, qui détecte et communique l’état de remplissage de la vessie aux tissus sous-jacents et aux nerfs afférents ^1,2. La perturbation de la barrière urothé....

Protocol

Souris urothéliales Piezo1/2 double knockout (Pz1/2-KO, génotype: Piezo1 fl^/fl; Piezo2 fl^/fl; Upk2^CRE+/-) et témoins (Pz1/2-C, génotype: Piezo1 fl^/fl; Piezo2 fl^/fl; Upk2^CRE-/-) ont été générés en interne à partir de souches parentales obtenues des laboratoires Jax (souche Piezo1 fl^/fl # 029213; Piezo2 fl^/fl souche # 027720; Upk2^CRE+/- souche # 029281). Des souris femelles (1,5 à 3 mois et pesant 17 à 20 g) et mâles (2 à 4 mois et 23 à 29 g de poids) ont été utilisées dans les expériences. Pour les expériences de cysti....

Results

Comportement mictionnel des souris urothéliales Piezo1/2 knockout

Pendant la phase de stockage du cycle miction, on suppose que l’urothélium détecte la tension exercée par l’urine accumulée dans la vessie et qu’il transduit ce stimulus mécanique en réponses cellulaires telles que la libération d’ATP^{sérosale 1,3}. Nous avons précédemment montré que les canaux PIEZO1 et PIEZO2 activés mécaniquement sont exprimés .......

Discussion

L’intégration de la vidéosurveillance est une modification rentable qui présente plusieurs avantages par rapport au VSA classique. Dans le VSA classique, qui est généralement utilisé comme test de point final, il est difficile de distinguer les points de vide qui se chevauchent. Ce n’est pas une préoccupation triviale, car les souris ont tendance à uriner plusieurs fois dans la même zone lorsque le test est prolongé pendant plusieurs heures, généralement dans les coins de leur cage. Ainsi, le premier avantage du RT-VSA e.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
1,00 po X 1,00 PO Profil à rainures en T - Quatre rainures en T ouvertes &ndash ;   ; coupé à 10 pouces	80/20	1010	Montant : 20
1.00" X 1,00 PO Profil à rainures en T - Quatre rainures en T ouvertes &ndash ;   ; coupé à 12 pouces	80/20	1010	Montant : 6
1.00" X 1,00 PO Profil à rainures en T - Quatre rainures en T ouvertes &ndash ;   ; coupé à 40 pouces	80/20	1010	Montant : 4
1.00" X 1,00 PO Profil à rainures en T - Quatre rainures en T ouvertes &ndash ; coupé à 14.75 pouces	80/20	1010	Quantité : 12
1.00" X 1,00 PO Profil à rainures en T - Quatre rainures en T ouvertes &ndash ; couper à 32 pouces	80/20	1010	Quantité : 5
1/4-20 Double Slide-in Economy T-Nut	80/20	3280	Quantité : 16
1/4-20 Triple Slide-in Economy T-Nut	80/20	3287	Quantité : 18
10 & 25 Series 2 Trou - 18mm Splat Inner Bracket avec Dual Support	80/20	14061	Quantité : 6
10 Série 3 Trous - Plaque plate droite	80/20	4118	Quantité : 8
Série 10 5 trous - Plaque plate « L »	80/20	4081	Quantité : 8
Série 10 5 trous - Plaque plate « T »	80/20	4080	Quantité : 8
Série 10 5 trous - Plaque plate en T	80/20	4140	Quantité : 2
Charnière amovible standard série 10 - Assemblage à droite	80/20	2064	Superficie : 2
Série 10 à 15 2 trous - Lite Transition Support d’angle intérieur	80/20	4509	Quantité : 6
Lampes à tube UV de 24 » de long	ADJ Products LLC	T8-F20BLB24	Quantité : 2 Ampoule 20W &ndash ; 24 » Longueur d’onde : 365nm
Feuille miroir acrylique	Plastiques		Nombre : 1 82,5 cm x 26,5 cm
Feuille miroir acrylique	Plastique		Quantité : 2 26,5 cm x 30,5 cm
Feuille miroir acrylique	Plastiques		Nombre : 2 82,5 cm x 30,5 cm
Polycarbonate AR (résistance UV)	80/20	65-2641	Quantité : 2 4,5 mm d’épaisseur, transparent, 38,5 cm x 26,5 cm
Polycarbonate AR (résistance aux UV)	80/20	65-2641	Quantité : 4 4,5 mm d’épaisseur, transparent, 38,5 cm x 21,5 cm
Polycarbonate AR (résistance aux UV)	80/20	65-2641	Quantité : 4 4,5 mm d’épaisseur, transparent, 26,5 cm x 21,5 cm
Polycarbonate AR (résistance aux UV)	80/20	65-2641	Quantité : 4 4,5 mm d’épaisseur, transparent 37,5 cm x 23,9 cm
Polycarbonate AR (résistance aux UV)	80/20	65-2641	Nombre : 4 4,5 mm d’épaisseur, Transparent , 24,4 cm x 23,9 cm
Papier de chromatographie (papier fin)	; Thermo Fisher Scientific	57144
Papier buvard Cosmos (papier épais)	Blick Art Materials	10422-1005
Excel	Microsoft Corporation
GraphPad	Prism GraphPad Software	Version 9.4.0	Logiciel de graphiques et de statistiques
ImageJ FIJI	NIH
Parafilm	Merck		film transparent
Quick Time Player 10.5 logiciel  ;	Lecteur multimédia	Apple
Logiciel		de sécurité Ben	système logiciel de vidéosurveillance
Standard End Fastener, 1/4-20	80/20	3381	Quantité : 80
Acrylique transmettant les UV	Spartech	Polycast Solacryl SUVT	Quantité : 2 38.5 cm x 26.5 cm  ;
Gel d’eau : HydroGel	ClearH2O  ;	; 70-01-5022	(https://www.clearh2o.com/product/hydrogel/)
Webcam	Logitech	C930e	Quantité : 4