Normalisation du transfert entre laboratoires entre cytomètres en flux pour la détection des lymphocytes chez les enfants vaccinés contre l’encéphalite japonaise

Résumé

Dans cette étude, une méthode a été développée pour faciliter le transfert de contextes expérimentaux et de modèles d’analyse entre deux cytomètres en flux dans deux laboratoires pour la détection des lymphocytes chez les enfants vaccinés contre l’encéphalite japonaise. La méthode de normalisation des expériences de cytomètre en flux permettra de mener efficacement des projets de recherche dans plusieurs centres.

Résumé

Un nombre croissant de laboratoires doivent collecter des données à partir de plusieurs cytomètres en flux, en particulier pour les projets de recherche réalisés dans plusieurs centres. Les défis liés à l’utilisation de deux cytomètres en flux dans différents laboratoires comprennent le manque de matériaux normalisés, les problèmes de compatibilité logicielle, les incohérences dans la configuration des instruments et l’utilisation de configurations différentes pour différents cytomètres en flux. Pour établir une expérience standardisée de cytométrie en flux afin d’assurer la cohérence et la comparabilité des résultats expérimentaux entre plusieurs centres, une méthode de normalisation rapide et réalisable a été établie pour transférer les paramètres entre différents cytomètres en flux.

Les méthodes développées dans cette étude ont permis le transfert de paramètres expérimentaux et de modèles d’analyse entre deux cytomètres en flux dans différents laboratoires pour la détection des lymphocytes chez les enfants vaccinés contre l’encéphalite japonaise (EJ). Une intensité de fluorescence constante a été obtenue entre les deux cytomètres en utilisant des billes standard de fluorescence pour établir les réglages du cytomètre. Des résultats comparables ont été obtenus dans deux laboratoires avec différents types d’instruments. En utilisant cette méthode, nous pouvons normaliser l’analyse pour évaluer la fonction immunitaire des enfants vaccinés par l’EJ dans différents laboratoires avec différents instruments, diminuer les différences de données et de résultats entre les cytomètres de flux dans plusieurs centres et fournir une approche réalisable pour l’accréditation mutuelle des résultats de laboratoire. La méthode de normalisation des expériences de cytomètre en flux assurera la performance efficace des projets de recherche dans plusieurs centres.

Introduction

La standardisation de la cytométrie en flux est utile pour la comparabilité des résultats obtenus à partir de différents cytomètres dans différents laboratoires et centres d’étude, et propice à la reconnaissance mutuelle des résultats pour améliorer l’efficacité du travail. Un nombre croissant de scénarios nécessitent une normalisation. Au cours du processus de développement du médicament, la normalisation de la cytométrie en flux est importante, car un test développé et validé soutiendra l’ensemble du processus de développement du médicament, de l’analyse préclinique à l’analyse clinique. Les méthodes de cytométrie en flux sont fréquemment transférées entre l’industr....

Protocole

L’étude a été approuvée par le Comité d’éthique de l’hôpital pour enfants de Beijing, Capital Medical University (numéro d’approbation: 2020-k-85). Le consentement éclairé des sujets humains a été levé car seuls les échantillons résiduels après l’utilisation d’essais cliniques dans cette étude. Deux laboratoires sont impliqués dans cette étude. Le laboratoire de transfert est l’endroit où la méthode normalisée a été développée à l’aide d’un cytomètre en flux. Le cytomètre de ce laboratoire est ci-après dénommé cytomètre A. Le laboratoire de méthodes d’essai est le laboratoire qui reçoit les méthodes utilisant un autre....

Résultats

La figure 1 montre une feuille de calcul globale du modèle de valeur cible pour les perles brillantes CST. À l’aide d’un tracé FSC/SSC, une porte polygonale est dessinée pour sélectionner les perles brillantes CST. Des diagrammes d’histogramme de 10 canaux de fluorescence ont été obtenus pour les billes brillantes CST : FITC, PE, BB700, PE-Cy7, APC, R718, APC-H7, BV421, V500 et BV605. La valeur cible pour chaque paramètre est affichée en montrant la médiane dans les portes de l’histogramme d.......

Discussion

L’immunophénotypage de sous-ensembles de lymphocytes du sang périphérique peut aider à comprendre les changements dans l’immunité adaptative à médiation cellulaire après la vaccination chez les enfants. Dans les applications cliniques, des situations inattendues se produisent, telles que l’incapacité de détecter les échantillons en temps opportun ou le remplacement d’un cytomètre en flux; Par conséquent, des méthodes normalisées rapides qui facilitent les transferts entre cytomètres en flux dans d.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
BD CompBeads Anti-souris Ig, &kappa ;/Negative Control Compensation Particules Set	BD	552843	compensation
BD FACSCanto	BD	FACSCanto	flow Cytométrie A dans le laboratoire de transfert
BD FACSDiva CS& T Research Beads	BD	655051	définir la ligne de base du cytomètre en flux et suivre les performances du cytomètre
BD Horizon BV421 Souris Anti-Humain CD127	BD	562436	Anticorps fluorescent  ;
BD Horizon BV605 Souris Anti-Humain CD27	BD	562656	Anticorps fluorescent  ;
BD Horizon V500 Souris Anti-Humain CD45	BD	560777	Anticorps fluorescent  ;
BD LSRFortessa	BD	LSRFortessa	flow Cytométrie B dans le laboratoire de méthode de test
BD OptiBuild BB700 Souris anti-humaine CD19	BD	745907	Anticorps fluorescent  ;
BD OptiBuild R718 Souris anti-humain CD8	BD	751953	Anticorps fluorescent  ;
BD Pharmingen APC Souris Anti-Humain CD45RA	BD	550855	Anticorps fluorescent  ;
BD Pharmingen APC-H7 Souris anti-humain CD3	BD	560176	Anticorps fluorescent
BD Pharmingen FITC Souris Anti-Humain CD4	BD	566320	Anticorps fluorescent  ;
BD Pharmingen PE Souris Anti-Humain CD25	BD	555432	Anticorps fluorescents  ;
BD Pharmingen PE-Cy7 Souris IgD Humaines	BD	561314	Anticorps fluorescents  ;
Brilliant Staining Buffer Plus	BD	566385	Staining
Buffer Centrifuge	Eppendorf	5810	Tube de centrifugation cellulaire
	BD Falcon	BD-35209715	15 mL Tube de centrifugation
CS& T Perles IVD	BD	662414	billes standard pour configurer les paramètres du cytomètre dans différents cytomètres en flux
Solution de lyse 10x Concentré	BD	349202	lyse des globules rouges
Saline tamponnée au phosphate (PBS)	Gibco	10010-023	PBS
Tube à essai à fond rond	BD Falcon 352235		5 mL Tube à essai