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Article de méthode

Modèle postopératoire d’iléus murin

2.3K vues

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DOI :

10.3791/66465

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12 juillet 2024

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* These authors contributed equally

Dans cet article

Résumé

Nous décrivons un modèle murin d’iléus postopératoire généré par manipulation intestinale. La fonction du transit gastro-intestinal, les changements pathologiques et l’activation des cellules immunitaires ont été évalués 24 h après la chirurgie.

Résumé

La plupart des patients souffrent d’iléus postopératoire (POI) après la chirurgie, ce qui est associé à une augmentation de la morbidité, de la mortalité et du temps d’hospitalisation. Le POI est une conséquence de dommages mécaniques pendant la chirurgie, entraînant une perturbation de la motilité dans le tractus gastro-intestinal. Les mécanismes de l’IOP sont liés à une sensibilité neuronale aberrante, à une altération de la fonction de barrière épithéliale et à une augmentation de l’inflammation locale. Cependant, les détails restent énigmatiques. Par conséquent, les modèles murins expérimentaux sont cruciaux pour élucider la physiopathologie et le mécanisme des lésions POI et pour le développement de nouvelles thérapies.

Ici, nous introduisons un modèle murin de POI généré par manipulation intestinale (IM) qui est similaire à la chirurgie clinique ; Ceci est réalisé par des dommages mécaniques à l’intestin grêle en massant l’abdomen 1 à 3 fois avec un coton-tige. Retard du transit gastro-intestinal IM 24 h après la chirurgie, tel qu’évalué par gavage FITC-dextran et détection par fluorescence du tube digestif segmentaire. De plus, le gonflement tissulaire de la sous-muqueuse et l’infiltration des cellules immunitaires ont été étudiés par coloration à l’hématoxyline et à l’éosine et par cytométrie en flux. Une pression appropriée de l’IM et un effet hyperémique sur l’intestin sont essentiels pour la procédure. Ce modèle murin de POI peut être utilisé pour étudier les mécanismes de lésions intestinales et de récupération après une chirurgie abdominale.

Introduction

L’iléus postopératoire (POI) est un syndrome qui pose un défi important dans le domaine de la santé humaine, notamment dans la prise en charge des patients subissant une chirurgie abdominale. Caractérisé par une récupération retardée de la motilité gastro-intestinale, le POI contribue à des séjours prolongés à l’hôpital et à une augmentation des coûts des soins de santé, mais il n’existe aucune définition, étiologie ou traitement établi1. Des recherches récentes ont mis en lumière le rôle central des cellules immunitaires dans la progression de POI 2,3,4

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Protocole

Les soins aux animaux et les procédures expérimentales ont été menés conformément aux Principes directeurs relatifs au soin et à l’utilisation des animaux (Chine) et ont été approuvés par le Comité d’éthique de l’hôpital de l’amitié de Pékin (n° 20-2056). Des souris C57BL/6 (âgées de 8 à 12 semaines) ont été utilisées pour l’étude.

1. Préparation à l’opération

  1. Accélérer toutes les souris pendant 12 h avant la modélisation prévue pour répondre à la standardisation des conditions expérimentales (Figure 1A).
  2. Préparer et stériliser les instrum....

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Résultats

Dans ce protocole, le POI a été induit chirurgicalement par une manipulation intestinale (MI), ce qui est similaire à l’effet de la chirurgie clinique. Dans le groupe fictif, une incision a été pratiquée sans l’IM. Les souris POI ont été sacrifiées 24 heures après la chirurgie POI avec des souris témoins factices. La fonction critique du tube digestif, la fonction de transit du contenu, a été détectée par gavage de FITC-dextran. Le modèle POI a été considéré comme un succès parce que l’intensité de la FITC a augmenté dan.......

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Discussion

Le succès de la chirurgie repose sur plusieurs étapes critiques. Tout d’abord, il est impératif de maintenir la cohérence pendant la chirurgie intra-muros intestinale (IM) pour induire des lésions étendues à l’intestin grêle. Une pression appropriée appliquée pendant la procédure IM et l’effet hyperémique qui en résulte sur l’intestin sont cruciaux pour le succès de l’opération. L’observation de l’ensemble du tube digestif devenant rose et affichant des taches hémorragiques rouges après .......

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Déclarations de divulgation

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Remerciements

Nous sommes reconnaissants envers le Centre des animaux de laboratoire, l’Institut de recherche clinique de Pékin et l’Hôpital de l’amitié de Pékin pour les soins qu’ils ont prodigués aux animaux. Ce travail a été soutenu par le Programme national de R&D sur les technologies clés (n° 2015BAI13B09), la Fondation des sciences naturelles de Pékin (n° 7232035), la Fondation nationale des sciences naturelles de Chine (n° 82171823, 82374190) et les jeunes chercheurs distingués de l’Hôpital de l’amitié de Pékin (n° yyqcjh2022-4).

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Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
1 M HEPESThermo15630080
APC anti-souris I-A/I-E (MHC-II)Biolegend107614
APC anti-souris TCRbBiolegend109212
APC/Cy7 anti-souris CD4Biolegend100414
APC/Cy7 anti-souris Ly6GBiolegend127624
Brilliant Violet 421 anti-souris CD69Biolegend104545
Brilliant Violet 421 anti-souris F4/80Biolegend123132
Brilliant Violet 785 anti-souris/humain CD44Biolegend103041
BUV395 anti-souris CD8aBD563786
BUV737 anti-souris CD3eBD612771
Collagénase IVSigma-AldrichC5138
Microscope de cultureCKX53Olympus
Désoxyribonucléase I du pancréas bovin (DNase I)Sigma-AldrichDN25-5G
DL-Dithiothreitol solutionSigma-Aldrich43816-10ML
EDTASigma-AldrichEDS-100G
FITC anti-souris CD45Biolegend
FITC-dextran (70 kWM)Sigma-AldrichFD70-100MGGastrointestinal Transit Assay
Kit de coloration HEsolarbioG1120
PE anti-souris CD11bBiolegend101208
PE anti-souris-1Biolegend114118
PE/Cy7 anti-souris CD11cBiolegend117318
PercollGE (Pharmacia)17-0891-01
Symphony A5 Cytomètre en fluxBD-Immunedétection et tri des cellules
TribromoéthanolSigma-AldrichT48402Anesthésie
Varioskan LUXThermoN16699Lecteur de microplaques multimode
Zombie Aqua Fixable Kit de viabilitéBiolegend423102Fluorescent teinture de viabilité  ;
147709

Références

  1. Chapman, S. J., Pericleous, A., Downey, C., Jayne, D. G. Postoperative ileus following major colorectal surgery. Br J Surg. 105 (7), 797-810 (2018).
  2. Farro, G., et al. CCR2-dependent monocyte-derived macrophages resolve inflammation and restore gut motili....

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Réimpressions et autorisations

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