Article de méthode

Une méthode pour le 2-Photon Imaging du flux sanguin dans le néocortex travers une fenêtre crânienne

DOI :

10.3791/678

25 février 2008

Dans cet article

Résumé

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Cortical dynamique du flux sanguin peut être étudiée in vivo par imagerie colorants fluorescents dextran injecté dans la veine caudale de rongeurs avec 2 microscopie biphotonique. Cette vidéo montre comment la dynamique de l'image du flux sanguin dans le néocortex de souris à travers un verre recouvert de la préparation fenêtre crânienne.

Résumé

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La capacité de l'image du système vasculaire cérébral (à partir de grands navires de capillaires) et la dynamique d'enregistrement du débit sanguin dans le cerveau intact de rongeurs vivants est une technique puissante. L'utilisation in vivo 2-microscopie biphotonique à travers une fenêtre crânienne il est possible de colorants image fluorescente injectée par voie intraveineuse. Cela permet un à l'image de la vascularisation corticale et aussi pour obtenir des mesures du flux sanguin. Cette technique a été initialement développé par David Kleinfeld et Winfried Denk. La méthode peut être utilisée pour étudier la dynamique des flux de sang pendant ou après une ischémie cérébrale, de maladies neurodégénératives, dans les tumeurs du cerveau, ou dans la physiologie du cerveau normal. Par exemple, il a été utilisé pour étudier comment un AVC provoque des changements dans la direction du flux sanguin et des changements dans la vitesse des globules rouges ou de flux dans et autour de l'infarctus. Ici, nous montrent comment utiliser deux microscopie biphotonique à la dynamique d'image du flux sanguin dans le néocortex de souris vivantes en utilisant des colorants fluorescents injectés dans la veine de la queue.

Protocole

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Injections veine de la queue de colorants fluorescents dextranes

  1. En vue de la vascularisation cérébrale l'image, les animaux doivent être injecté par voie intraveineuse avec un colorant fluorescent. Nous utilisons le dextran conjugué colorants parce que la fraction de dextran empêche le colorant de traverser la barrière hémato-encéphalique et la fuite des vaisseaux sanguins.
  2. Les souris sont anesthésiés à l'isoflurane (4% pour l'induction, de 1,5-2% lors de l'injection).
  3. La queue est désinfectée avec de l'alcool à 70%.
  4. Avec une aiguille de calibre 26, 75-100 ul d'un 5% v / v de solution de rhodamine dextr....

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Discussion

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Cortical dynamique du flux sanguin peut être étudiée in vivo par imagerie colorants fluorescents dextran injecté dans la veine caudale de rongeurs avec microscopie à deux photons. Cette vidéo montre une méthode pour savoir comment la dynamique de l'image du flux sanguin dans le néocortex de souris à travers un verre recouvert de la préparation fenêtre crânienne.

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Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
Fluorescéine isothio-cyanate-dextranRéactifSigma-AldrichFD500Smol wt 500,000
Rhodamine B isothio-cyanate-dextranRéactifSigma-AldrichR9379mol wt ~70,000

Références

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  1. Kleinfeld, D., Mitra, P. P., Helmchen, F., Denk, W. Fluctuations and stimulus-induced changes in blood flow observed in individual capillaries in layers 2 through 4 of rat neocortex. Proc Nat Acad Sci. 95, 15741-15746 (1998).
  2. Pologruto, T. A., Sabatini, B. L., Svoboda, K.

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Mots-clés

Microscopie biphotoniquedynamique du flux sanguinimagerie par fen tre cr nienneimagerie de la vasculature c r braleinjection de colorant fluorescentinjection par la veine caudaleflux sanguin du n ocorteximagerie in vivomicroscopie balayage lasermesure de la vitesse sanguine

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