Évaluation de la fonction ventriculaire droite dans des modèles expérimentaux d’hypertension artérielle pulmonaire

Summary

La présentation de méthodes détaillées pour l’évaluation de la fonction du ventricule droit améliorera la qualité et la fiabilité de la recherche sur l’hypertension pulmonaire, offrant un cadre solide pour les études futures et améliorant la reproductibilité entre les différents laboratoires.

Abstract

L’hypertension pulmonaire (HTP) est une maladie chronique associée à une survie réduite, ce qui en fait un domaine de recherche essentiel. Les modèles expérimentaux de l’HTP ont considérablement amélioré notre compréhension de sa physiopathologie et facilité la conception d’essais observationnels et cliniques de petite envergure. Cependant, il est crucial d’établir des méthodologies standardisées pour assurer la comparabilité entre les différentes études expérimentales et les différents groupes de recherche. La normalisation améliore non seulement la reproductibilité, mais favorise également la collaboration entre les équipes de recherche.

Dans cette vidéo, nous décrivons les étapes méthodologiques nécessaires pour analyser avec précision les paramètres fonctionnels du PH. Il s’agit notamment de l’évaluation échocardiographique, de la ponction invasive du ventricule droit (VD) et du calcul de l’indice de Fulton. En ce qui concerne l’échocardiographie, la mesure du temps d’accélération artérielle pulmonaire et du rapport de temps d’éjection pulmonaire, ainsi que le calcul de la puissance RV, sont présentés en détail. En ce qui concerne les mesures invasives, les procédures essentielles, y compris les protocoles d’anesthésie, le positionnement optimal de l’animal, la configuration de la ventilation mécanique, l’ouverture précise de la paroi thoracique, la visualisation du VR et les techniques de ponction du VR, sont décrites.

La méthodologie de la dissection ventriculaire (indice de Fulton) est expliquée en détail, ainsi que le calcul du rapport RV/ventricule gauche plus septum, corrigé du poids corporel de l’animal. Nous pensons que la présentation détaillée de ces méthodes améliorera la qualité et la fiabilité de la recherche sur l’HTP, en offrant un cadre solide pour les études futures et en améliorant la reproductibilité entre les différents laboratoires.

Introduction

Une mesure fonctionnelle adéquate de la fonction du ventricule droit (VD) chez les petits animaux est devenue essentielle depuis l’augmentation des études utilisant des modèles animaux dans les sciences respiratoires et cardiovasculaires. Il existe plusieurs modèles animaux d’hypertension pulmonaire (HTP), en utilisant la monocrotaline¹, l’hypoxie² ou l’hypoxie Sugen + 3. Ils ont bien servi à démêler de nouvelles voies physiopathologiques ^1,4 et à étudier de nouveaux traitements pharmacologiques⁵ et non pharmacologi....

Protocol

Le protocole d’étude a été approuvé par le Comité d’éthique de l’utilisation des animaux (CEUA) de l’Université fédérale de Rio de Janeiro sous le numéro de procédure 043/22. Toutes les procédures étaient conformes aux Principes de soins aux animaux de laboratoire et au Guide pour le soin et l’utilisation des animaux de laboratoire de l’Académie nationale des sciences des États-Unis. L’étude a suivi les directives ARRIVE¹¹.

1. Préparation des animaux et protocole expérimental

1. Calculez le nombre d’animaux indiqué précédemment^{: 12}.
   REMARQUE : En tenant compte du f....

Results

Pour les analyses statistiques, la normalité et la variance de chaque variable ont été testées à l’aide du test de Shapiro-Wilk. Les données sont présentées sous forme de moyennes ±écart-type. Le test t non apparié a été utilisé pour comparer les concentrations de particules dans les groupes témoin (CTRL) et l’hypertension artérielle pulmonaire (HAP) (p<0,05).

Altérations échocardiographiques dans le modèle animal de l’HTAP
La figure 4

Discussion

L’HTAP est une maladie progressive caractérisée par un remodelage vasculaire excessif, qui favorise une augmentation de la résistance vasculaire pulmonaire, entraînant une augmentation de la postcharge VD¹⁴. En conséquence, le RVSP représente une variable fonctionnelle qui est directement corrélée à la gravité de l’HTAP¹⁵. Au fil du temps, la réponse adaptative du VD est une hypertrophie concentrique compensatoire (mesurée par l’indice de F.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
réactifs
alcool 70 %	Monténégro	ALC70-001
Gel conducteur	Mercor	CG-002
solution saline (NaCl 0,9 %)	BioPharma	SAL-009
Instruments
19 G set	veines du cuir cheveluDescarpack	SVS-19G
Pince kelly incurvée	ABC instrumentos cirurgicos	CKF-003
Pince Kelly	ABC instrumentos cirurgicos	KF-004
Aiguilles (18, 22 et 26 G)	Descarpack	NDL-MIX
Boîte de Pétri	GlassLab	-150
Lame de rasoir	ABC instrumentos cirurgicos	RB-005
Scalpel	ABC instrumentos cirurgicos	SC-006
Ciseaux	ABC instrumentos cirurgicos	SCIS-007
Ligne de suture	ABC instrumentos cirurgicos	SUT-008
Seringues (1, 3 et 5 mL)	Descarpack	SYR-135
Canule de trachéotomie	MedTech	TC-010
Pince à épiler	ABC instrumentos cirurgicos	TWZ-011
Drugs
Chlorhydrate de dextrokétamine 5 %	Cristá ; lia	DXT-005	87,5 mg/kg intrapéritonéal
Isoflurane 1 mL/mL 240 mL	Cristá ; lia	ISO-240	2,5 % solution d’inhalation
Chlorhydrate de lidocaïne 1 %	Cristá ; lia	LID-001	400 & micro ; L sous-cutanée localement
Monocrotaline	Sigma-Aldrich	C2401	60 mg/kg intrapéritonéale
Bromure de pancuronium 2 mg/mL	Cristá ; lia	PAN-002	2 mg/kg
d’héparine sodique administrable 5000 UI/mL	Cristá ; lia	HEP-5000	dilué 1:4 dans 1 mL
Chlorhydrate de xylazine 2 %	Syntec	XYL-002	12,5 mg/kg intrapéritonéale
Équipement
GraphPad Prism 9	GraphPad Software, Inc	GP9
Moniteur vétérinaire multiparamètre en réseau LifeWindow 9x	Digicare Santé animale	LW9x
Logiciel LabView	National Instruments, Corp.	LV-2019
MATLAB R2019a (Version) Logiciel	The MathWorks, Inc.	MATLAB-2019
Moniteur et transducteur de signal	MedTech	MST-015
Balance de précision	Sartorius	PS-020
R540 Mice& Appareil d’anesthésie pour rat animal	RWD Life Schience Co.,LTD	R540-ANA
Scale	Ohaus	SCL-025
Servo-i ventilateur mécanique  ;	Getinge AB	SERVO-I	FiO2 = 21 % ; volume courant = 8 ml/kg, fréquence respiratoire = 70 bpm et PEP = 3 cmH2O
SonoView software	SONOTEC Ultraschallsensorik Halle GmbH	SV-2020
UGEO HM70A system  ;	Samsung Eletrô ; nica da Amazô ; nia LTDA	HM70A
G*Power 3.1.9.7	Université de Dü ; sseldorf, Allemagne	gpower