Culture et dénombrement des bactéries dans un échantillon de sol

1. préparation des Dilutions de sol

1. Pour commencer la procédure, peser 10 g d’échantillon de sol et ajouter à 95 mL d’eau désionisée. Bien agiter la suspension et qualifier de « A ».
2. Avant que le sol s’affaisse, prélever 1 mL de la suspension avec une pipette stérile et transférez-la sur un blanc 9-mL d’eau désionisée. Vortex soigneusement et l’étiquette « B ».
3. Répétez cette étape de dilution trois fois, chaque fois avec 1 mL de la suspension précédente et un 9-mL désionisée vide. Ces étiquettes séquentiellement comme tubes C, D et E. Cela se traduit par des dilutions de 10^-1 par le biais de 10^-5 grammes / mL de sol

2. faire répandre des plaques pour Culture bactérienne

1. Pour agrandir les colonies bactériennes, prendre trois boîtes de gélose de levure-peptone préparés à l’avance et étiquette les échantillons C, D et E. Vortex C, D et E et pipette 0,1 mL dans chaque assiette. Cela augmente la valeur de la dilution en outre, d’un facteur dix (C = 10^-3, D = 10^-4, E = 10^-5).
2. Ensuite, trempez un épandeur de verre dans l’éthanol. Placez le séparateur dans une flamme pendant quelques secondes à s’enflammer et brûler de l’éthanol. Cela va stériliser l’épandeur.
3. Maintenez l’épandeur au-dessus de la première plaque jusqu'à ce que la flamme s’éteint. Ouvrir la plaque rapidement, maintient le couvercle fermer par. Touchez le séparateur à l’agar loin de l’inoculum (Inoculum = utilisés pour commencer une culture de cellules) se refroidir et s’étend ensuite la chute d’inoculum autour de la surface de la gélose jusqu'à disparaissent des traces de liquide. Replacez le couvercle de la plaque.
4. Re-flamme de l’épandeur et répétez le processus avec la plaquette suivante, travailler rapidement pour ne pas contaminer l’agar avec organismes aéroportés
5. Incuber les boîtes de bactéries à la température ambiante pendant 1 semaine. Assurez-vous que les plaques sont inversées au cours de l’incubation pour éviter les gouttes d’humidité par condensation de tomber sur la surface de la gélose.

3. la fabrication des plaques de propagation pour actinomycètes

1. Pour cultiver des actinomycètes, prendre trois plaques de glycérol-caséine préparés à l’avance et les qualifier de B, C et D. en utilisant les techniques décrites précédemment, insérer la plaque 0,1 mL de la suspension, B, C et D. Les dilutions inférieures sont utilisées car les actinomycètes sont généralement présentes sous forme de 1/10^ème de la population bactérienne (B = 10^-2, C = 10^-3, D = 10^-4).
2. Incuber les boîtes d’actinomycètes (inversés) à température ambiante pendant 2 semaines.

4. bactérien et comtes d’actinomycètes

1. Après incubation, examiner toutes les plaques de bactéries avec soin et notez les différences dans la forme et la taille de la colonie. Lorsqu’il est cultivé sur la gélose, bactéries produisent des colonies visqueux, allant de l’incolore à orange vif, jaune ou rose. En revanche, actinomycètes colonies sont calcaires, ferme, coriace et casseront sous pression, où autres colonies bactériennes seront salir. Cela permet aux colonies à se distinguer par le toucher avec une anse stérile.
2. Compter et noter le nombre de colonies bactériennes, y compris les actinomycètes. Ne compter que plaques avec 30-200 colonies par boîte.

5. isolement des Cultures pures

1. Sélectionner l’un des plaques des colonies bactériennes individuelles. Plus de colonies peuvent être sélectionnés, s’il y a un intérêt particulier dans le sol. Utiliser une plaque de grande dilution, car il a tendance à avoir des colonies pures qui sont séparés de bien. Choisissez seulement les colonies qui sont bien séparées des colonies voisines et look morphologiquement distincts les uns des autres.
2. Stériliser la boucle en plongeant dans de l’alcool et il flamber. Rapidement ouvrir la boîte de Pétri d’intérêt et appuyer sur la boucle à un point apparent dans l’agar pour la refroidir. Ensuite, retirer une petite quantité d’une colonie d’intérêt sur la boucle.
3. Prendre une plaque de peptone-levure fraîche, faire une strie de quelques centimètres long sur un côté. Stériliser et refroidir à nouveau, puis faire une rayure qui traverse le streak initial que sur la première passe. Répétez cette procédure deux fois plus de la même manière. Cette « dilution » trainage se traduit par des cellules sur la boucle étant séparés l’un de l’autre. Placer la plaque dans un endroit sombre à incuber à température ambiante pendant deux semaines.