Name: Les cellules souches embryonnaires des cellules dérivées endothéliales pour traitement de lischémie des membres postérieurs (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-01-23T00:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 11 s
Description: Découvrez la transplantation de cellules endothéliales dérivées de cellules souches embryonnaires pour traiter l'ischémie des membres postérieurs chez la souris. Cette méthode utilise l'imagerie de bioluminescence pour suivre les cellules in vivo et évaluer leur effet thérapeutique.

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Les auteurs remercient Andrea Axtell, Satoshi Itoh, MD, Jeff Velotta, MD, Grant Hoyt, Robert C. Robbins, MD, Jin Yu, MD, Tim Doyle, PhD, et le Stanford petit noyau d&#39;imagerie animale pour l&#39;assistance technique. Les auteurs remercient également AM Bickford, Inc pour le soutien des équipements vétérinaires. Cette recherche a été financée par des subventions de recherche du National Institutes of Health (R01 HL-75 774, R01 CA098303, R21 HL085743, 1K12 HL087746), le tabac en Californie Programme connexes Disease Research de l&#39;Université de Californie (15IT-0257 et 1514RT-0169) , et le California Institute for Regenerative Medicine (RS1-00183). NH est soutenu par une bourse de l&#39;American Heart Association. peut Heart Association.

1. La différenciation des CSE de souris en cellules endothéliales <ol><li> Le protocole de différenciation en cellules endothéliales CES est décrite ailleurs et n&#39;est pas l&#39;objet de ce protocole 2,3. Brièvement, les cellules sont autorisés à se différencier, et les cellules qui sont positifs pour les marqueurs endothéliaux tels que CD31 ou vasculaire cadhérine endothéliale (VE-cadhérine) sont ensuite purifiées par tri cellulaire activé par fluorescence (FACS). </li></ol> 2. Construction du gène rapporteur Double Fusion et transduction lentiviraux <ol><li> La bioluminescence peut être utilisé pour suivre les cellules qui sont modifiées pour exprimer des gènes rapporteurs tels que la luciférase de luciole (fluctuations). Pour cette application, nos cellules contiennent à la fois fluctuations et amélioré la protéine de fluorescence verte gène de fusion (eGFP) sous le contrôle d&#39;un promoteur interne ubiquitine. En vue de modifier les cellules, le vecteur lentiviral contenant transgène clés optimisés éléments génétiques de remplir les critères de bio-sécurité ainsi que l&#39;efficacité de transduction accrue, UFP-FG vecteur développé dans notre laboratoire portant le gène de fusion fluc-eGFP journaliste peut être utilisé de façon stable transduire les cellules après différenciation. Cette construction de fusion permet à la fois la bioluminescence et de suivi de fluorescence des cellules transplantées. La procédure pour générer des particules virales, la transduction et la production de cellules marquées que les gènes rapporteurs express est décrit ailleurs 4. </li></ol> 3. La transplantation de l&#39;ESC-dérivées des cellules endothéliales de la patte postérieure ischémique <ol><li> Commencez la procédure en préparant une souris qui a subi une ischémie des membres postérieurs pour la transplantation de cellules. Pour ce faire, placez la souris dans la chambre de l&#39;induction anesthésique contenant 1-3% d&#39;isoflurane dans 100% d&#39;oxygène à un débit d&#39;1l/min. </li><li> Laisser la souris dans la chambre de l&#39;induction jusqu&#39;à ce qu&#39;il soit insensible aux stimuli extérieurs. Puis enlever l&#39;animal de la chambre de l&#39;induction. </li><li> Ensuite, placer l&#39;animal dans la position couchée sur la table d&#39;opération et de le connecter à un flux continu de 1-3% d&#39;isoflurane dans 100% d&#39;oxygène à un débit d&#39;1l/min. </li><li> Essuyer la peau de la patte postérieure avec trois gommages bétadine et de l&#39;alcool en alternance. </li><li> Une fois que la peau est nettoyée, obtenir un million ESC dérivées des cellules endothéliales dans 30 ul de tampon phosphate salin (PBS). Chargez ces cellules dans une aiguille de calibre 28. </li><li> Lorsque les cellules sont prêtes, soulevez doucement et d&#39;étendre la patte arrière pour mieux visualiser l&#39;emplacement du muscle gastrocnémien. Alors que la jambe est prolongée, insérez l&#39;aiguille à travers la peau dans le muscle sous-jacent. Prenez soin de ne pas s&#39;approcher de l&#39;os. Doucement et injecter lentement le mélange de cellules 30 uL dans le gastrocnémien. Pour une injection intramusculaire, 30 uL est proche de la limite de volume qui peut être injecté. Par conséquent, de calibre 28 seringues à insuline sont préférés car, dans notre expérience, ils éliminent le volume de perte dans les aiguilles de seringues. </li><li> Après l&#39;injection est terminée, retournez la souris dans la cage de récupération et de le surveiller en continu jusqu&#39;à éveillé. Permettre à l&#39;animal de récupérer pendant plusieurs heures et ensuite procéder à l&#39;en imagerie par bioluminescence in vivo des cellules transplantées. </li></ol> 4. L&#39;imagerie par bioluminescence de l&#39;ESC-dérivée des cellules endothéliales in vivo <ol><li> L&#39;ESC transplanté des cellules dérivées endothéliales ont été modifiées pour exprimer les fluctuations et le gène de fusion EGFP sous le contrôle d&#39;un promoteur interne ubiquitine. Par conséquent, la bioluminescence peut être utilisé pour suivre les cellules au sein du membre postérieur ischémique. </li><li> Pour commencer cette étape, mettez le système d&#39;imagerie par bioluminescence et du logiciel d&#39;acquisition image vivante. Puis initialiser le système d&#39;acquisition et de spécifier les dimensions du champ de vision. </li><li> Ensuite, placez le papier noir mat sur la boîte à absorber les émissions d&#39;imagerie de fond. </li><li> Une fois la boîte d&#39;imagerie est prêt, placer la souris dans la chambre de l&#39;induction anesthésique contenant 1-3% d&#39;isoflurane dans de l&#39;oxygène à la sortie de 1l/min. Laisser la souris dans la chambre de l&#39;induction jusqu&#39;à ce qu&#39;il soit insensible aux stimuli extérieurs. Puis enlever l&#39;animal de la chambre de l&#39;induction. </li><li> Enlever les poils des deux membres postérieurs en utilisant un rasoir électrique, si nécessaire. </li><li> Injecter 10 uL de D-luciférine par gramme de poids corporel dans le péritoine. Le D-luciférine est préparé à l&#39;avance dans les solutions de stock filtrée de 15 mg / ml dans le PBS. </li><li> Une fois la luciférine est injecté, placer l&#39;animal dans la boîte d&#39;imagerie sur le papier noir en position couchée, connecté à un flux continu de l&#39;isoflurane. </li><li> Placer les animaux dans la boîte d&#39;imagerie et de la connexion à l&#39;isoflurane. </li><li> Commencez à acquérir des images pendant 10-60 secondes, afin de déterminer un temps d&#39;exposition optimal pour lequel l&#39;image n&#39;est pas saturé. Si l&#39;image devient saturé, de réduire le temps d&#39;exposition. Si le signal de bioluminescence est très faible, augmenter le temps d&#39;exposition. </li><li> Using le temps d&#39;exposition optimale, poursuivre l&#39;acquisition de photos à chaque 1-3 minutes jusqu&#39;à ce que le signal atteint le maximum, puis se fane. Lorsque l&#39;acquisition est terminée, enregistrez le fichier. </li><li> Pour analyser les données, sélectionner des régions d&#39;intérêt (ROI) qui couvrent le site d&#39;injection. Comme témoin négatif, un retour sur investissement similaires peuvent être sélectionnées pour la jambe non opérée. En utilisant le logiciel, mesurer la radiance totale, qui est exprimée en unités de photons / seconde / cm 2 / stéradian (P / S / cm 2 / sr), pour le ROI pour chaque point temporel. La valeur maximale doit être utilisé dans les données finales. Les données peuvent également être exportées vers Excel pour une utilisation future. </li><li> Une fois toutes les données sont acquises, le retour à l&#39;animal de la cage de récupération et de surveiller en permanence jusqu&#39;à ce que le réveil des animaux. </li><li> Répétez cette procédure pour suivre les cellules au cours du temps. </li><li> A un point de temps désiré, l&#39;animal peut être euthanasiés pour l&#39;évaluation de la fonction des tissus. </li></ol> 5. Les résultats représentatifs <img src="/files/ftp_upload/old/1034_2009_1_22_4/figure 1.png" alt="Figure 1" width="600" height="600" /> Une image représentant la bioluminescence des cellules transplantées dans le membre postérieur gauche ischémique est montré dans la figure 1. Pendant l&#39;acquisition de la bioluminescence, l&#39;intensité va augmenter avec le temps, et la valeur maximale obtenue au cours du temps doivent être déclarés comme la valeur finale.

<ol><li>Niiyama, H., Huang, N. F., Rollins, M., Cooke, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+model+of+hindlimb+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22JoVE%22%5BJournal%5D)">Murine model of hindlimb ischemia.</a> JoVE. , (2008).</li>
<li>Levenberg, S., Golub, J. S., Amit, M., Itsakovitz-Eldor, J., Langer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+cells+derived+from+human+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Endothelial cells derived from human embryonic stem cells.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99, 4391-4396 (2002).</li>
<li>Yamashita, J., Itoh, H., Hirashima, M., Ogawa, M., Nishikawa, S., Yurugi, T., Naito, M., Nakao, K., Nishikawa, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flk1-positive+cells+derived+from+embryonic+stem+cells+serve+as+vascular+progenitors%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Flk1-positive cells derived from embryonic stem cells serve as vascular progenitors.</a> Nature. 408, 926-926 (2000).</li>
<li>De, A., Yaghoubi, S. S., Gambhir, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Applications+of+lentiviral+vectors+in+noninvasive+molecular+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Applications of lentiviral vectors in noninvasive molecular imaging.</a> Methods Mol Biol. 433, 177-202 (2008).</li>
<li>Niiyama, H., Kai, H., Yamamoto, T., Shimada, T., Sasaki, K., Murohara, T., Egashira, K., Imaizumi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Roles+of+endogenous+monocyte+chemoattractant+protein-1+in+ischemia-induced+neovascularization%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Coll.+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Roles of endogenous monocyte chemoattractant protein-1 in ischemia-induced neovascularization.</a> J. Am. Coll. Cardiol. 44, 661-666 (2004).</li>
<li>Cook, M. J. The anatomy of the laboratory mouse. , Academic Press. New York. (1976).</li>
<li>Contag, P. R., Olomu, I. N., Stevenson, D. K., Contag, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioluminescent+indicators+in+living+mammals%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Med%22%5BJournal%5D)">Bioluminescent indicators in living mammals.</a> Nature Med. 4, 245-247 (1998).</li>
<li>Ray, P., De, A., Min, J. J., Tsien, R. Y., Gambhir, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+tri-fusion+multimodality+reporter+gene+expression+in+living+subjects%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Imaging tri-fusion multimodality reporter gene expression in living subjects.</a> Cancer Res. 64, 1323-1330 (2004).</li>
<li>Huang, N. F., Lee, R. J., Li, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+and+physical+regulation+of+stem+cells+and+progenitor+cells%3A+potential+for+cardiovascular+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng%22%5BJournal%5D)">Chemical and physical regulation of stem cells and progenitor cells: potential for cardiovascular tissue engineering.</a> Tissue Eng. 13, 1809-1823 (2007).</li>
<li>Cao, F., Lin, S., Xie, X., Ray, P., Patel, M., Zhang, X., Drukker, M., Dylla, S. J., Connolly, A. J., Chen, X., Weissman, I. L., Gambhir, S. S., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+visualization+of+embryonic+stem+cell+survival%2C+proliferation%2C+and+migration+after+cardiac+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">In vivo visualization of embryonic stem cell survival, proliferation, and migration after cardiac delivery.</a> Circulation. 113, 1005-1114 (2006).</li>
<li>Wilson, K., Yu, J., Lee, A., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+and+in+vivo+bioluminescence+reporter+gene+imaging+of+human+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">In vitro and in vivo bioluminescence reporter gene imaging of human embryonic stem cells.</a> J Vis Exp. , (2008).</li>
</ol>

CES sont une source de cellules prometteuses pour le traitement de l&#39;ischémie tissulaire en raison de leur plasticité de différenciation et de leur capacité à donner naissance à des lignées de cellules comprenant les trois feuillets embryonnaires, dont les cellules endothéliales. Pour surmonter les problèmes éthiques associés avec les CES, cellules souches pluripotentes induites (CISP) peut être une source de cellules souches pluripotentes alternatives qui surmonte les préoccupations éthiques. Outre les CES, les cellules souches adultes...

<table><tbody><tr><td>Outils chirurgicaux</td><td>Outil</td><td>Fine Science Tools</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Aiguille de seringue</td><td>Outil</td><td>BD Biosciences</td><td></td><td>Une seringue insulinique de calibre 28G est préférée</td></tr><tr><td>Solution saline tamponnée au phosphate </td><td>Réactif</td><td>Invitrogen</td><td></td><td></td></tr><tr><td>D-luciférine</td><td>Réactif</td><td>Biosynth International, Inc</td><td></td><td>Préparer la D-luciférine à l’avance sous forme de solutions mères filtrées à 15 mg/mL dans du PBS</td></tr><tr><td>Système d’imagerie bioluminescente IVIS 200 et logiciel d’acquisition </td><td>Équipement</td><td><a href="http://www.perkinelmer.com/Catalog/Category/ID/IVIS%20Series" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Xenogen Corporation</a></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

les cellules souches embryonnaires des cellules dérivées endothéliales pour traitement de l&#39;ischémie des membres postérieurs

Embryonic Stem Cell-Derived Endothelial Cells for Treatment of Hindlimb Ischemia

Artérielle périphérique maladie (PAD) les résultats de rétrécissement des artères périphériques qui fournissent le sang oxygéné et de nutriments pour les jambes et les pieds, cette pathologie entraîne des symptômes tels que la claudication intermittente (douleur à la marche), des ulcérations douloureuses ischémiques, ou même menaçant le membre gangrène. On croit généralement que l&#39;endothélium vasculaire, une monocouche de cellules endothéliales qui investit la surface luminale de tous les vaisseaux sanguins et lymphatiques, joue un rôle dominant dans l&#39;homéostasie vasculaire et la régénération vasculaire. En conséquence, base de cellules souches de régénération de l&#39;endothélium peut être une approche prometteuse pour le traitement de la MAP. Dans cette vidéo, nous démontrons la transplantation de cellules souches embryonnaires (CSE) dérivées des cellules endothéliales pour le traitement de l&#39;ischémie unilatérale hindimb comme un modèle de la PAD, suivi par des non-invasive de la cellule de suivi homing et de la survie par imagerie par bioluminescence. Les matériaux et les procédures spécifiques pour la livraison et l&#39;imagerie cellulaire seront décrites. Ce protocole suit une autre publication dans la description de l&#39;induction d&#39;une ischémie des membres postérieurs par Niiyama et al. 1

La procédure chirurgicale pour la livraison de cellules souches embryonnaires dérivées des cellules endothéliales de la patte postérieure ischémique est démontrée, avec des non-invasive de suivi par imagerie par bioluminescence.

Les cellules souches embryonnaires des cellules dérivées endothéliales pour traitement de l&#39;ischémie des membres postérieurs

L'artériopathie oblitérante des membres inférieurs (AOMI) résulte d'un rétrécissement des artères périphériques qui acheminent le sang oxygéné et les nutriments vers les jambes et les pieds. Cela...

Maladie artérielle périphérique. La MAP résulte d'un rétrécissement des artères périphériques qui approvisionnent les jambes et les pieds en sang et en oxygène, entraînant une dysfonction vasculaire. Afin de déterminer si les cellules souches peuvent être utilisées pour traiter la MAP, nous injectons des cellules endothéliales dérivées de cellules souches embryonnaires dans le membre postérieur après l'induction d'un état d'ischémie.Étant donné que ces cellules ont été modifiées pour exprimer la luciférase de luciole, elles peuvent être suivies par imagerie bioluminescente afin de déterminer si elles migrent vers le site de la lésion et exercent un effet thérapeutique. Bonjour, je suis John Cook. Je suis professeur de médecine au sein de la division de médecine cardiovasculaire de l'Université Stanford.Notre laboratoire s'intéresse à l'angiogenèse et à la régénération vasculaire. Dans cette vidéo, deux de mes chercheurs postdoctoraux, le Dr Nan Wong et Hir Niyama, vous présenteront les procédures de transplantation cellulaire thérapeutique dans l'ischémie de membre hémi et l'imagerie non invasive de la survie cellulaire. Ces procédures comprennent les étapes suivantes : l'administration de cellules souches embryonnaires différenciées en cellules stromales pour le traitement de l'ischémie unilatérale de membre postérieur, et le suivi non invasif de l'homéostasie et de la survie cellulaire par imagerie bioluminescente.Commençons. Commencez la procédure en préparant une souris de souche SV 1 29 âgée de huit mois ayant subi une ischémie des membres postérieurs en vue d'une transplantation cellulaire. Pour ce faire, placez la souris dans la chambre d'induction anesthésique contenant 1 à 3 % d'ISO fluoré dans 100 % d'oxygène, avec un débit de un litre par minute.Laisser le rongeur dans la chambre d'induction jusqu'à ce qu'il ne réagisse plus aux stimuli externes. Ensuite, retirer l'animal de la chambre d'induction. Puis placer l'animal en position dorsale sur la table d'opération et le connecter à un débit continu de 1 à 3 % d'ISO dans 100 % d'oxygène, avec un débit de un litre par minute.Essuyez la peau de la patte postérieure avec trois frictions alternées de Bétadine et d'alcool. Une fois la peau nettoyée, prélevez 1 million de cellules endothéliales dérivées de cellules souches embryonnaires murines dans 30 microlitres de solution saline tamponnée au phosphate. Chargez ces cellules dans une aiguille de calibre 28 à l'aide du PBS.Lorsque les cellules sont prêtes, soulevez doucement et étendez la patte postérieure afin de mieux visualiser l'emplacement du muscle gastrocnémien. Pendant que la patte est étendue, insérez l'aiguille à travers la peau jusqu'au muscle sous-jacent. Veillez à ne pas toucher l'os et injectez lentement le mélange cellulaire de 30 microlitres dans le muscle gastrocnémien.Pour une injection intramusculaire, 30 microlitres correspondent à peu près à la limite de volume pouvant être injecté. Par conséquent, les seringues à insuline de calibre 28 sont préférées car, selon notre expérience, elles éliminent le volume perdu dans les aiguilles de seringue. Une fois l'injection terminée, remettez la souris dans la cage de récupération.Laisser l'animal se remettre pendant plusieurs heures, puis procéder à l'imagerie bioluminescente in vivo des cellules transplantées. Les cellules endothéliales dérivées de CSE transplantées ont été modifiées pour exprimer à la fois le gène de la luciférase de luciole et le gène de fusion de la protéine fluorescente verte améliorée sous le contrôle d'un promoteur ubiquitine interne. Par conséquent, la bioluminescence peut être utilisée pour suivre les cellules au sein du membre ischémique.Pour commencer cette étape, allumez le système d'imagerie bioluminescente et le logiciel d'acquisition d'images vivantes. Ensuite, initialisez le système d'acquisition. Puis spécifiez les dimensions du champ de vision.Placez ensuite du papier mat noir dans la boîte d'imagerie pour absorber l'émission de fond. Une fois la boîte d'imagerie prête, placez la souris dans la chambre d'induction d'anesthésie contenant de l'isoflurane à une concentration de 1 à 3 % dans de l'oxygène, avec un débit de sortie de un litre par minute. Laissez la souris dans la chambre d'induction jusqu'à ce qu'elle ne réagisse plus aux stimuli externes.Ensuite, retirez l'animal de la chambre d'induction. Injectez 10 microlitres de Lucifer par gramme de poids corporel dans le péritoine. Le luciférien est préparé à l'avance sous forme de solutions mères filtrées à 15 milligrammes par millilitre dans du PBS.Une fois la luciférine injectée, placer l'animal dans la boîte d'imagerie au-dessus du papier noir en position dorsale, connecté à un flux continu de fluorure d'isoflurane. Commencer à acquérir des images pendant 10 à 60 secondes afin de déterminer le temps d'exposition optimal pour lequel l'image n'est pas saturée. Si l'image devient saturée, réduire le temps d'exposition.Si le signal de bioluminescence est très faible, augmentez le temps d'exposition. En utilisant le temps d'exposition optimal, continuez à acquérir des images toutes les une à trois minutes jusqu'à ce que le signal atteigne son maximum, puis s'estompe. Après chaque acquisition, enregistrez le fichier pour analyser les données, puis sélectionnez des régions d'intérêt ou ROI couvrant le site d'injection comme témoin négatif.Une ROI similaire peut être sélectionnée pour la jambe non opérée. À l'aide du logiciel, mesurez la radiance totale pour les mêmes ROI dans chaque fichier.La valeur maximale doit être utilisée dans les données finales. Les données peuvent également être exportées vers un tableur Excel pour une utilisation ultérieure. Une fois toutes les données acquises, remettez l'animal dans la cage de récupération et surveillez-le jusqu'à son réveil ; répétez cette procédure pour suivre les cellules.Au fil du temps et à un moment donné souhaité, l'animal peut être euthanasié afin d'évaluer la fonction tissulaire. Voici un exemple de courbe temporelle d'imagerie de bioluminescence de cellules transplantées dans le membre postérieur ischémique gauche, un jour après l'injection des cellules. La zone entourée en rouge correspond à la région d'intérêt (ROI) où les cellules ont été administrées. La couleur est corrélée au nombre de cellules transplantées, les teintes rouge et jaune indiquant une intensité de bioluminescence plus forte par rapport aux couleurs bleue et verte.Comme vous pouvez le constater, le membre témoin ne présente aucune bioluminescence, tandis que le membre injecté avec les cellules montre une bioluminescence intense pendant l'acquisition de la bioluminescence. Le signal de bioluminescence dans la région d'intérêt (ROI) augmentera au fil du temps jusqu'à atteindre une valeur maximale, puis diminuera sur ce graphique. La valeur maximale de bioluminescence, mesurée par la radiance maximale, est obtenue 27 minutes après le début de l'acquisition.Cette valeur maximale doit être indiquée pour l'analyse des données. Nous venons de vous montrer comment administrer et suivre des cellules souches embryonnaires différenciées en cellules sérielles pour le traitement de l'ischémie des membres inférieurs. Cette procédure peut être précédée par l'induction d'une ischémie des membres inférieurs, ce qui est démontré dans une autre vidéo JoVE par ER et al.Lors de cette procédure, il est important de se rappeler de limiter le volume de cellules injectées dans le PBS à un maximum de 30 microlitres afin d'éviter une fuite sous-cutanée des cellules. De plus, lors de l'acquisition d'images de bioluminescence, évitez de saturer l'intensité de l'image avec des intervalles d'exposition trop longs. Voilà, c'est tout.Merci d'avoir regardé et bonne chance avec vos expériences.

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