Synthèse en phase solide

1. chargement de la résine

1. Pour un navire de synthèse de peptide 100mL, ajouter résine de chlorure (CCT) 2-chlorotrityl (1,1 mmol/g, g 0,360, 0.400 mmol). Ajouter 20 mL de DMF et laissez-les gonfler pendant 30 min sous le N_2.
2. Égoutter les perles sous vide et ajouter 10 mL de DMF.
3. Ajouter 500 mg Fmoc-Ala-OH (1,60 mmol) et 2,5 mL i -Pr₂EtN et mélanger sous N₂ pendant 15 min.
4. Égoutter le solvant sous vide et répéter le chargement avec Fmoc-Ala-OH pendant 15 min.
5. Égoutter le solvant sous vide et laver les perles 10 ml DMFunder N₂et égoutter sous vide 3 x.

2. la déprotection du groupe Fmoc

1. Ajouter 10 mL 20 % 4-méthylpipéridine dans le DMF et remuer les perles sous N₂ pendant 15 min.
2. Égoutter le solvant sous vide et répétez la déprotection.
3. Laver les billes avec 10 mL de DMF sous N₂ et drain sous vide 3 x.

3. exécution de l’essai de Kaiser

1. Effectuer le test de Kaiser en ajoutant 1 à 2 gouttes de solution A (0,5 mL 0,01 M KCN, pyridine 24,5 mL), solution B (1 g ninhydrine, 20 mL de n-butanol) et la solution C (phénol 20 g, 10 mL de n-butanol) chacun dans deux tubes à essai. Un tube à essai sera le contrôle tandis que l’autre va surveiller la réaction.
2. Ajouter quelques perles de la résine de la cuve de réaction à éprouvette de réaction et de la chaleur vers le haut les deux tubes à essai à 110 ° C.
3. Si la déprotection est terminée, le contenu du tube à essai prennent une couleur bleu/violet foncée. Si la déprotection est incomplète ou défaillante, la solution reste jaune. Comparer l’éprouvette de réaction avec l’éprouvette de contrôle.

4. les blocs de construction prochaine de couplage

1. Égoutter le solvant sous vide.
2. Laver les billes avec 10 mL de N-méthyl-2-pyrrolidone N₂ et vidange le solvant sous vide.
3. Pour commencer le prochain accouplement, ajoutez 10 mL NMP, 620 mgFmoc-Phe-OH (1,6 mmol), 610 mg HBTU (1,6 mmol) et 2,5 mLi -Pr₂EtN et laissez la résine à bouillonner sous N₂ pour 30 min.
4. Égoutter le solvant sous vide.
5. Laver les billes avec 10 mL de DMF sous N₂ et drain sous vide 3 x.
6. Effectuer le Kaiser pour chercher l’achèvement de l’assemblage d’essai (voir étapes 3.1 à 3.3). Les perles et la solution dans l’éprouvette doivent être jaunes.

5. clivage du Peptide au large de la résine

1. Fendre le reste du groupe Fmoc procédant 2.1 à 2.3.
2. Après que le solvant est drainé sous vide, ajouter 40 mL de solution de clivage (95 % TFA, 2,5 % H₂O, conseils de 2,5 %) à la résine et la bulle sous N₂ pendant 3 h.
3. Placer un nouveau ballon récepteur sur le synthétiseur de peptide et vidange theTFA solution contenant le peptide désiré sous vide dans le ballon à nouveau.

6. précipitation et j’ai la consolation du Peptide

1. Séparer la solution TFA en 4 fioles coniques et ajouter 25 mL éther diéthylique froid (−20 ° C) à chaque flacon à précipiter le peptide.
2. Centrifuger les flacons (3 000 tr/min, 0-4 ° C) pendant 20 min. décanter le reste de la solution TFA et éther des fioles coniques et de concentrer le précipité de peptide pour s’offrir le dipeptide désiré comme un solide blanc.