Name: Murin procédure transplantation rénale (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-07-10T00:00:00.000+00:00
Duration: 18 min 48 s
Description: Apprenez la transplantation rénale chez la souris, une technique chirurgicale complexe pour étudier la biologie des greffes. Cette méthode permet d'évaluer la fonction du greffon par surveillance de la créatinine.

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Ces études ont été soutenues en partie par un financement par le NIH R01 AI36532 au GAH. Nous tenons à souligner l&#39;appui exceptionnel de la greffe de la pathologie fournies par le Dr Tibor Nâdasdy, et les précieux conseils et de la prévoyance prévu par le regretté Dr Charles G. Orosz à initier cet effort de recherche.

Récolte des donneurs d&#39;organes (2): <ol><li> Anesthésier le donneur à l&#39;aide de pentobarbital 65mg/kg IP; anesthésie est maintenue par l&#39;isoflurane (2-3%). </li><li> Faire une incision médiane du sternum au pubis pour entrer dans le ventre des bailleurs de fonds et d&#39;exposer le rein gauche en déplaçant latéralement l&#39;intestin vers le côté droit. </li><li> Isoler le rein gauche par ligature des vaisseaux, et en divisant surrénales et des testicules avec une suture 8-0 soie. </li><li> Mobiliser l&#39;aorte au-dessus de sa jonction avec l&#39;artère et la veine rénales. </li><li> Mobiliser la veine cave inférieure (VCI) ci-dessus et en dessous de sa jonction avec l&#39;artère et la veine rénales. </li><li> Ligaturer l&#39;aorte dessous de l&#39;artère rénale et la veine avec une suture de soie 8-0 à minimiser les saignements. </li><li> Disséquer l&#39;uretère gauche du hile rénal à la vessie. </li><li> Exposer la jonction urétéro-vésicale en utilisant la rétraction caudale sur le dôme de la vessie. </li><li> Accise un petit correctif elliptique de la vessie contenant la jonction urétérovésicale gauche, utilisé pour la reconstruction urinaires par une anastomose vésico-à-vessie. L&#39;uretère droit n&#39;est pas incluse avec la vessie. </li><li> Ligaturer les IVC dessous de l&#39;artère rénale et la veine avec une suture 8-0 soie. </li><li> Ligaturer l&#39;aorte au-dessus de l&#39;artère rénale et la veine, et lentement perfuser la greffe in situ avec 0.2-0.4ml froid, hépariné solution de Ringer lactate via l&#39;aorte. </li><li> Ligaturer la veine cave inférieure au-dessus de l&#39;artère rénale et la veine avec une suture 8-0 soie. </li><li> Transect la veine rénale à sa jonction avec la VCI. </li><li> Diviser l&#39;aorte en oblique, à environ 2mm dessous de l&#39;artère rénale. </li><li> Retirez le rein et sa vascularisation avec l&#39;uretère attaché à la vessie le patch en bloc. Stocker dans une solution de lactate de Ringer sur la glace. </li><li> Euthanasier la souris donneuse par dislocation cervicale sous anesthésie. </li></ol> Récipiendaire Transplantation (2): <ol><li> Anesthésier le destinataire avec 65 mg / kg de pentobarbital ip et maintenir l&#39;anesthésie par isoflurane (2-3%). </li><li> Faire une incision médiane, la couverture de l&#39;intestin avec de la gaze humide et soigneusement rétractent vers le côté gauche. </li><li> Ligaturer l&#39;uretère droit, l&#39;artère rénale et la veine, et retirer le rein droit. </li><li> Soigneusement isoler et de clampage de l&#39;aorte sous-rénale et IVC avec deux pinces de 4 mm, après ligature microvasular les branches lombaires. </li><li> Placer une suture nylon 10-0 grâce à une épaisseur totale de l&#39;aorte et se rétractent pour faire une aortaotomy elliptique en une seule coupe (environ un cinquième du diamètre du vaisseau). </li><li> Faites une venotomy longitudinale en perçant la VCI avec une aiguille de calibre 30 et d&#39;étendre de façon appropriée en utilisant microciseaux. </li><li> Rincer la fois l&#39;aorte et IVC avec une solution saline héparinée pour effacer le sang ou des caillots intraluminale. </li><li> Retirez le rein d&#39;un donneur de la glace et la placer intra-abdominale dans le flanc droit de la souris. Le rein d&#39;un donneur est maintenu humide avec un tampon de gaze imbibé de sérum physiologique froid. </li><li> Placer deux points de suture séjour à l&#39;apex proximales et distales de l&#39;aortaotomy destinataires avec le brassard aortique donateurs. </li><li> Faire une anastomose de bout-en-côte entre le brassard aortique donateurs et la paroi antérieure de l&#39;aortaotomy destinataires, en utilisant 2 ~ 3 continue 10-0 sutures en nylon à l&#39;extérieur de l&#39;aorte. </li><li> Tournez la greffe rein d&#39;un donneur sur le flanc gauche de la destinataire. répétez la procédure précédente entre le brassard aortique donateurs et la paroi postérieure de l&#39;aortaotomy destinataires </li><li> Effectuer une anastomose de bout-en-latérale entre la veine rénale donateurs et la paroi postérieure de la VCI destinataires, à l&#39;aide de 4 à 5 points de suture en nylon 10-0 continue à l&#39;intérieur de la VCI. puis la paroi antérieure de la veine rénale IVC et les bailleurs de fonds sont fermées avec 4 ~ 5 points de suture continue en dehors de la VCI. </li><li> L&#39;anastomose des deux veines et l&#39;artère doit être terminée dans les 20 minutes. </li><li> Rincer la greffe avec une solution saline froide à plusieurs reprises pendant l&#39;anastomose. </li><li> Diviser le dôme de la vessie bénéficiaire, et arrêter le saignement avec cautérisation. </li><li> Faire une petite entaille sur le dôme. </li><li> Placer deux points de suture séjour de nylon 10-0 à anastomize le patch donateurs petite vessie avec le dôme vésical destinataires. Chaque côté de l&#39;anastomose est suturée avec 8 ~ 10 points de suture continue. </li><li> Fermer l&#39;abdomen en deux couches avec des continues 4-0 stérile, suture synthétique absorbable vicryl. </li><li> Donnez souris receveuses 0.4ml eau chaude salée pendant la chirurgie par injection intraveineuse intermittente. </li></ol> Soins post-opératoires du bénéficiaire <ol><li> Après la fermeture de l&#39;abdomen, une seule injection intramusculaire de pénicilline (500U/10g) est administré (2). </li><li> En outre, les bénéficiaires reçoivent 0,05 mg / kg par voie intramusculaire buprénorphine au jour 0 et après la chirurgie le jour 1 pour la douleur. Après la chirurgie, les receveurs de greffe de recevoir de l&#39;eau contenant Sulfatrim (100mg/kg) jusqu&#39;à ce que l&#39;expérience est TErminated. </li><li> Pour les premières 24h après l&#39;intervention des souris sont conservés dans un incubateur à température contrôlée. </li><li> Souris généralement récupérer de l&#39;anesthésie à 1 heure de l&#39;opération et reçoivent de la nourriture régulière et eau ad libitum. </li><li> Sutures de la peau sont retirés 2 semaines après la chirurgie. </li></ol> Récipiendaire néphrectomie <ol><li> Anesthésier le destinataire 4 ~ 7 jours après la transplantation rénale avec 65 mg / kg de pentobarbital ip; anesthésie est maintenue par l&#39;isoflurane (2-3%). </li><li> Ouvrez l&#39;abdomen par une incision médiane. </li><li> Couverture de l&#39;intestin avec une solution saline gaze imbibée et soigneusement se rétracter sur le côté droit. </li><li> Retirez le rein gauche, après ligature de la veine rénale uretère gauche, et l&#39;artère. </li><li> Fermer l&#39;abdomen en deux couches avec des continues 4-0 suture synthétique absorbable vicryl. </li></ol> Whole Mesures créatinine sanguine <ol><li> Hebdomadaire à la collecte de sang toutes les deux semaines de moins de 0,2 cc est réalisée soit submandibularly sans anesthésie ou rétro-orbital sous anesthésie à l&#39;isoflurane. </li><li> Quantitative l&#39;ensemble des taux de créatinine sanguine sont déterminés en utilisant un analyseur portatif I-Stat clinique (Heska Corp, Fort Collins, CO). </li><li> Unités conventionnelles (mg / dl) sont convertis en unités SI de micromol / L en multipliant les unités conventionnelles de 88,4. </li></ol>

<ol><li>Russell, P. S., Chase, C. M., Colvin, R. B., Plate, J. M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kidney+transplants+in+mice.+An+analysis+of+the+immune+status+of+mice+bearing+long-term%2C+H-2+incompatible+transplants%5BTitle%5D)+AND+%22JExpMed%22%5BJournal%5D)">Kidney transplants in mice. An analysis of the immune status of mice bearing long-term, H-2 incompatible transplants.</a> JExpMed. 147, 1449-1468 (1978).</li>
<li>Zhang, Z., Schlachta, C., Duff, J., Stiller, C., Grant, D., Zhong, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+techniques+for+kidney+transplantation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Improved techniques for kidney transplantation in mice.</a> Microsurgery. 16 (2), 103-109 (1995).</li>
</ol>

Expériences sur les animaux ont été effectuées en conformité avec les directives et les règlements stipulés par le IACUC Ohio State University.

Nous avons effectué environ 1200 cas de transplantation rénale chez les souris avec un taux de succès technique de&gt; 90%. Comparé à une transplantation cardiaque, le taux de réussite de la transplantation rénale est généralement faible. Cependant, notre laboratoire a maintenu un taux de réussite élevé (&gt; 90%) de la transplantation rénale. Les points clés de la réussite sont de réduire les lésions de reperfusion au rein d&#39;un donneur à la fois et les bénéficiaires, et de minimiser les saignements et des thrombose...

<table><tbody><tr><td>i-STAT</td><td>Autre</td><td>HESKA</td><td>Cat 5101</td><td></td></tr><tr><td>Cartouche i-STAT</td><td>Autre</td><td>HESKA</td><td>CAT 5110-CREA</td><td></td></tr><tr><td>Sulfatrim</td><td>Autre</td><td>Actavis</td><td>R02109</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Autre</td><td>NOVAPLUS</td><td>CA-0474</td><td></td></tr><tr><td>Suture 10-0</td><td>Chirurgie</td><td>Sharpoint</td><td>AK0100</td><td></td></tr></tbody></table>

murin procédure transplantation rénale

Murine Renal Transplantation Procedure

La transplantation rénale orthotopique chez la souris est une procédure difficile techniquement. Bien que les premières transplantations de reins chez des souris ont été effectuées par Russell et al il ya 30 ans (1) et affiné par Zhang et al ans plus tard (2), peu de gens dans le monde ont maîtrisé cette procédure. Dans notre laboratoire, nous avons réalisé avec succès 1200 transplantations rénales orthotopique avec un taux&gt; 90% de survie. Les points clés de la réussite incluent un contrôle rigoureux des lésions de reperfusion, des saignements et des thromboses, tant durant la procédure et post-transplantation, et l&#39;utilisation de 10-0 au lieu de 11-0 de suture pour anastomoses. Soins post-opératoires et le traitement du destinataire est extrêmement important pour le succès de greffe et d&#39;évaluation. Tous les bénéficiaires du greffon rénal recevoir des antibiotiques sous la forme d&#39;une injection de pénicilline immédiatement post-transplantation et Sulfatrim dans l&#39;eau potable en permanence. La santé animale global est évalué quotidiennement et toute analyse de la créatinine sanguine sont effectuées régulièrement avec un portable i-STAT machine pour évaluer la fonction du greffon.

La transplantation rénale chez les souris est une procédure techniquement difficile qui exige attention soins post-opératoires et le traitement de la réussite.

Murin procédure transplantation rénale

La transplantation rénale orthotopique chez la souris est une procédure techniquement complexe. Bien que les premières transplantations rénales chez la souris aient été réalisées par Russell...

La procédure de transplantation rénale chez la souris commence par la récolte d'un organe donneur au cours de laquelle le rein gauche est prélevé sur la souris donneur et conservé sur glace. Le rein droit est ensuite retiré de la souris receveuse afin de faire place au rein donneur. Le rein donneur est alors sorti de la glace et transplanté dans la souris receveuse.La souris est laissée en phase de récupération pendant quatre jours avant que le rein natif restant soit retiré. Après sept jours, les niveaux de créatinine sont surveillés à l’aide d’un analyseur clinique portable I STAT afin d’évaluer la fonction de la greffe. Bonjour, je suis Sarah Heimer du laboratoire du Dr Greg Hadley et du Département de chirurgie des transplantations de l’Université d’État de l’Ohio.Aujourd'hui, nous allons vous présenter une procédure de transplantation rénale chez la souris. La chirurgie de transplantation rénale que vous allez voir aujourd'hui sera réalisée par notre neurochirurgien expert résident, Jing Wing. Veuillez utiliser cette procédure dans notre laboratoire afin d'étudier les événements immunologiques liés au rejet de greffe, ainsi que les stratégies permettant d'empêcher ce rejet.Commençons donc. Pour débuter la récolte de l'organe donneur, une pincée de la queue est effectuée afin de s'assurer que l'animal est pleinement anesthésié. En travaillant dans un champ stérile et en utilisant des instruments stérilisés, réalisez une incision médiane chez la souris anesthésiée, de la région du sternum jusqu'au pubis, puis exposez le rein gauche en déplaçant l'intestin vers le côté droit afin de permettre la perfusion du rein donneur. Placez des fils de soie TY480 autour de l'aorte et de la veine cave inférieure, en dessous et au-dessus de l'artère et de la veine rénales.Perfusé lentement in situ avec une solution de lactate de Ringer héparinée froide par l'aorte infrarénale. Isoler le rein gauche en ligaturant et sectionnant les vaisseaux surrénalien et testiculaires ainsi que quelques branches lombaires à l’aide d’un fil de soie 8-0. Ensuite, mobiliser la jonction de l’aorte et de la veine cave inférieure avec l’artère et la veine rénales ; placer quatre fils de soie 8-0 autour de l’aorte et de la veine cave inférieure en dessous et au-dessus de l’artère et de la veine rénales.Pour minimiser les saignements, ligaturer d'abord l'aorte en dessous du vaisseau rénal. Ensuite, disséquer l'uretère gauche depuis le hile rénal jusqu'à la vessie. Exposer l'uretère au niveau de la jonction vésicale en utilisant une rétraction caudale sur le dôme de la vessie.Veiller à éviter l'uretère droit pour exciser une petite plaque elliptique de la vessie contenant la jonction vésico-urétérale gauche. Cette plaque sera utilisée pour la reconstruction urinaire par une anastomose vésico-vésicale. Ensuite, ligaturer l'aorte au-dessus de l'artère et de la veine rénales.Perfuser lentement la trame *in situ* avec une solution de lactate de Ringer héparinée froide par l'aorte infrarénale. Sectionner l'aorte obliquement à environ deux millimètres en dessous de l'artère rénale. Enfin, retirer le rein ainsi que son apport vasculaire, avec l'uretère attaché au lambeau vésical sur le bloc.Le rein doit être conservé dans une solution de lactate de Ringer sur de la glace jusqu'à ce qu'il soit prêt à être greffé dans le receveur hôte, puis euthanasier la souris donneuse par dislocation cervicale sous anesthésie. Comme cela a été démontré précédemment, la transplantation chez le receveur commence par une pincée pour s'assurer que l'animal est complètement anesthésié. Pour commencer la chirurgie, réalisez une incision médiane, recouvrez l'intestin avec un pansement humide et rétractez-le soigneusement vers le côté gauche.Afin de réaliser avec succès cette greffe rénale, une anastomose doit être effectuée entre la manchette aortique du donneur et l'aorte du receveur. La veine rénale du donneur doit être anastomosée à la veine cave inférieure du receveur et le lambeau vésical du donneur à la vessie du receveur. L'artère et la veine rénales urétérales droites.Retirer le rein après la ligature. Isoler soigneusement les branches lombaires et clampser l'aorte infrarénale et la veine cave inférieure à l’aide de deux pinces microvasculaires de quatre millimètres. Placer une suture en nylon 10/0 à pleine épaisseur de l’aorte et rétracter afin de réaliser une ouverture aortique elliptique par une incision unique d’environ un cinquième du diamètre du vaisseau.Ensuite, réalisez une veinotomie longitudinale en perforant la veine cave inférieure avec une aiguille de calibre 30 et prolongez-la de manière appropriée à l’aide de ciseaux microchirurgicaux. Irriguez l’aorte et la veine cave inférieure avec une solution saline héparinée afin d’éliminer le sang intraluminal ou les caillots. Retirez le rein donneur de la glace et placez-le dans le flanc droit de la souris.Placer deux points de suture de maintien à l'apex proximal et distal de l'ouverture aortique du receveur avec la manchette aortique du donneur. Réaliser une anastomose termino-latérale entre la manchette aortique du donneur et la paroi antérieure de l'ouverture aortique du receveur à l’aide de deux à trois sutures continues en nylon 10-0 à l’extérieur de l’aorte. Après avoir positionné la greffe rénale du donneur sur le flanc gauche du receveur.Répétez la procédure précédente entre la manchette aortique du donneur et la paroi postérieure de l'aorte du receveur. Il est important de se rappeler que l'anastomose de la veine et de l'artère doit être terminée dans les 20 minutes. Le greffon doit également être rincé plusieurs fois avec du sérum physiologique froid pendant l'anastomose.Réaliser une anastomose termino-latérale entre la veine rénale du donneur et la paroi postérieure de la veine cave inférieure du receveur à l’aide de quatre à cinq sutures continues en nylon 10/0 à l’intérieur de la veine cave inférieure. Fermer la paroi antérieure de la veine cave inférieure et la veine rénale du donneur avec quatre à cinq sutures continues à l’extérieur de la veine cave inférieure. L’étape suivante consiste à diviser le dôme de la vessie du receveur.Arrêter le saignement par cautérisation. Une fois la fixation terminée, pratiquer une petite incision sur le dôme et placer deux fils de soutien en nylon 10/0 pour anastomoser le lambeau vésical du donneur avec le dôme vésical du receveur ; suturer chaque côté de l'anastomose avec huit à dix points continus. Enfin, fermer l'abdomen en deux plans avec des sutures continues en vicryl synthétique absorbable stérile 4/0.Les soins postopératoires commencent par l'administration d'une injection intramusculaire unique de pénicilline. Le receveur de la greffe reçoit également 0,05 milligramme par kilogramme de buprénorphine par voie intramusculaire le jour zéro et le jour un suivant l'intervention chirurgicale pour soulager la douleur, ainsi qu'un approvisionnement continu en eau contenant du sulfa trim. Les 24 premières heures suivant l'opération, l'animal est maintenu dans un incubateur à température contrôlée.Les sutures cutanées sont retirées deux semaines après la chirurgie. L'ablation du rein natif restant est essentielle afin que la diminution de la fonction de la greffe rénale puisse être surveillée par des mesures de la créatinine sérique. Elle est généralement réalisée entre quatre et sept jours après la greffe initiale du rein donneur et implique les principales étapes utilisées lors de l'excision du rein chez la souris donneuse.L'anesthésie au fluorure d'ISO est utilisée pour séder l'animal hôte afin de pouvoir prélever des échantillons sanguins. Les taux quantitatifs de créatinine dans le sang total, mesurés par voie rétro-orbitaire, servent d'indicateur pour évaluer la fonction de la greffe et sont déterminés à l'aide d'un analyseur clinique portable I stat. Les unités conventionnelles sont converties en unités SI en multipliant les unités conventionnelles par 88,4.La concentration de créatinine est exprimée en micromoles par litre. Les animaux se remettent généralement deux à trois heures après la chirurgie et présentent un comportement normal de souris après l'ablation du rein natif restant. La survie de l'animal dépend de la fonction de la greffe rénale, qui peut être évaluée par des examens quotidiens de l'état de santé global de l'animal et de la créatinine.Mesure du sang total à l’aide d’un analyseur clinique portable i-STAT servant de référence. Chez une souris normale non greffée, le taux de créatinine est proche de 20 micromolaire. Une dysfonction du greffon rénal est envisagée lorsque la souris présente des signes de maladie et que le taux de créatinine est élevé, proche de 100 micromolaire.Nous venons de vous montrer la procédure de transplantation rénale chez la souris. Bien que cette procédure soit techniquement difficile, notre laboratoire a obtenu de très bons résultats dans sa réalisation. Voilà donc tout.Merci d'avoir regardé et bonne chance avec vos expériences.

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