Murin procédure transplantation rénale

La procédure de transplantation rénale chez la souris commence par la récolte d'un organe donneur au cours de laquelle le rein gauche est prélevé sur la souris donneur et conservé sur glace. Le rein droit est ensuite retiré de la souris receveuse afin de faire place au rein donneur. Le rein donneur est alors sorti de la glace et transplanté dans la souris receveuse.

La souris est laissée en phase de récupération pendant quatre jours avant que le rein natif restant soit retiré. Après sept jours, les niveaux de créatinine sont surveillés à l’aide d’un analyseur clinique portable I STAT afin d’évaluer la fonction de la greffe. Bonjour, je suis Sarah Heimer du laboratoire du Dr Greg Hadley et du Département de chirurgie des transplantations de l’Université d’État de l’Ohio.

Aujourd'hui, nous allons vous présenter une procédure de transplantation rénale chez la souris. La chirurgie de transplantation rénale que vous allez voir aujourd'hui sera réalisée par notre neurochirurgien expert résident, Jing Wing. Veuillez utiliser cette procédure dans notre laboratoire afin d'étudier les événements immunologiques liés au rejet de greffe, ainsi que les stratégies permettant d'empêcher ce rejet.

Commençons donc. Pour débuter la récolte de l'organe donneur, une pincée de la queue est effectuée afin de s'assurer que l'animal est pleinement anesthésié. En travaillant dans un champ stérile et en utilisant des instruments stérilisés, réalisez une incision médiane chez la souris anesthésiée, de la région du sternum jusqu'au pubis, puis exposez le rein gauche en déplaçant l'intestin vers le côté droit afin de permettre la perfusion du rein donneur. Placez des fils de soie TY480 autour de l'aorte et de la veine cave inférieure, en dessous et au-dessus de l'artère et de la veine rénales.

Perfusé lentement in situ avec une solution de lactate de Ringer héparinée froide par l'aorte infrarénale. Isoler le rein gauche en ligaturant et sectionnant les vaisseaux surrénalien et testiculaires ainsi que quelques branches lombaires à l’aide d’un fil de soie 8-0. Ensuite, mobiliser la jonction de l’aorte et de la veine cave inférieure avec l’artère et la veine rénales ; placer quatre fils de soie 8-0 autour de l’aorte et de la veine cave inférieure en dessous et au-dessus de l’artère et de la veine rénales.

Pour minimiser les saignements, ligaturer d'abord l'aorte en dessous du vaisseau rénal. Ensuite, disséquer l'uretère gauche depuis le hile rénal jusqu'à la vessie. Exposer l'uretère au niveau de la jonction vésicale en utilisant une rétraction caudale sur le dôme de la vessie.

Veiller à éviter l'uretère droit pour exciser une petite plaque elliptique de la vessie contenant la jonction vésico-urétérale gauche. Cette plaque sera utilisée pour la reconstruction urinaire par une anastomose vésico-vésicale. Ensuite, ligaturer l'aorte au-dessus de l'artère et de la veine rénales.

Perfuser lentement la trame *in situ* avec une solution de lactate de Ringer héparinée froide par l'aorte infrarénale. Sectionner l'aorte obliquement à environ deux millimètres en dessous de l'artère rénale. Enfin, retirer le rein ainsi que son apport vasculaire, avec l'uretère attaché au lambeau vésical sur le bloc.

Le rein doit être conservé dans une solution de lactate de Ringer sur de la glace jusqu'à ce qu'il soit prêt à être greffé dans le receveur hôte, puis euthanasier la souris donneuse par dislocation cervicale sous anesthésie. Comme cela a été démontré précédemment, la transplantation chez le receveur commence par une pincée pour s'assurer que l'animal est complètement anesthésié. Pour commencer la chirurgie, réalisez une incision médiane, recouvrez l'intestin avec un pansement humide et rétractez-le soigneusement vers le côté gauche.

Afin de réaliser avec succès cette greffe rénale, une anastomose doit être effectuée entre la manchette aortique du donneur et l'aorte du receveur. La veine rénale du donneur doit être anastomosée à la veine cave inférieure du receveur et le lambeau vésical du donneur à la vessie du receveur. L'artère et la veine rénales urétérales droites.

Retirer le rein après la ligature. Isoler soigneusement les branches lombaires et clampser l'aorte infrarénale et la veine cave inférieure à l’aide de deux pinces microvasculaires de quatre millimètres. Placer une suture en nylon 10/0 à pleine épaisseur de l’aorte et rétracter afin de réaliser une ouverture aortique elliptique par une incision unique d’environ un cinquième du diamètre du vaisseau.

Ensuite, réalisez une veinotomie longitudinale en perforant la veine cave inférieure avec une aiguille de calibre 30 et prolongez-la de manière appropriée à l’aide de ciseaux microchirurgicaux. Irriguez l’aorte et la veine cave inférieure avec une solution saline héparinée afin d’éliminer le sang intraluminal ou les caillots. Retirez le rein donneur de la glace et placez-le dans le flanc droit de la souris.

Placer deux points de suture de maintien à l'apex proximal et distal de l'ouverture aortique du receveur avec la manchette aortique du donneur. Réaliser une anastomose termino-latérale entre la manchette aortique du donneur et la paroi antérieure de l'ouverture aortique du receveur à l’aide de deux à trois sutures continues en nylon 10-0 à l’extérieur de l’aorte. Après avoir positionné la greffe rénale du donneur sur le flanc gauche du receveur.

Répétez la procédure précédente entre la manchette aortique du donneur et la paroi postérieure de l'aorte du receveur. Il est important de se rappeler que l'anastomose de la veine et de l'artère doit être terminée dans les 20 minutes. Le greffon doit également être rincé plusieurs fois avec du sérum physiologique froid pendant l'anastomose.

Réaliser une anastomose termino-latérale entre la veine rénale du donneur et la paroi postérieure de la veine cave inférieure du receveur à l’aide de quatre à cinq sutures continues en nylon 10/0 à l’intérieur de la veine cave inférieure. Fermer la paroi antérieure de la veine cave inférieure et la veine rénale du donneur avec quatre à cinq sutures continues à l’extérieur de la veine cave inférieure. L’étape suivante consiste à diviser le dôme de la vessie du receveur.

Arrêter le saignement par cautérisation. Une fois la fixation terminée, pratiquer une petite incision sur le dôme et placer deux fils de soutien en nylon 10/0 pour anastomoser le lambeau vésical du donneur avec le dôme vésical du receveur ; suturer chaque côté de l'anastomose avec huit à dix points continus. Enfin, fermer l'abdomen en deux plans avec des sutures continues en vicryl synthétique absorbable stérile 4/0.

Les soins postopératoires commencent par l'administration d'une injection intramusculaire unique de pénicilline. Le receveur de la greffe reçoit également 0,05 milligramme par kilogramme de buprénorphine par voie intramusculaire le jour zéro et le jour un suivant l'intervention chirurgicale pour soulager la douleur, ainsi qu'un approvisionnement continu en eau contenant du sulfa trim. Les 24 premières heures suivant l'opération, l'animal est maintenu dans un incubateur à température contrôlée.

Les sutures cutanées sont retirées deux semaines après la chirurgie. L'ablation du rein natif restant est essentielle afin que la diminution de la fonction de la greffe rénale puisse être surveillée par des mesures de la créatinine sérique. Elle est généralement réalisée entre quatre et sept jours après la greffe initiale du rein donneur et implique les principales étapes utilisées lors de l'excision du rein chez la souris donneuse.

L'anesthésie au fluorure d'ISO est utilisée pour séder l'animal hôte afin de pouvoir prélever des échantillons sanguins. Les taux quantitatifs de créatinine dans le sang total, mesurés par voie rétro-orbitaire, servent d'indicateur pour évaluer la fonction de la greffe et sont déterminés à l'aide d'un analyseur clinique portable I stat. Les unités conventionnelles sont converties en unités SI en multipliant les unités conventionnelles par 88,4.

La concentration de créatinine est exprimée en micromoles par litre. Les animaux se remettent généralement deux à trois heures après la chirurgie et présentent un comportement normal de souris après l'ablation du rein natif restant. La survie de l'animal dépend de la fonction de la greffe rénale, qui peut être évaluée par des examens quotidiens de l'état de santé global de l'animal et de la créatinine.

Mesure du sang total à l’aide d’un analyseur clinique portable i-STAT servant de référence. Chez une souris normale non greffée, le taux de créatinine est proche de 20 micromolaire. Une dysfonction du greffon rénal est envisagée lorsque la souris présente des signes de maladie et que le taux de créatinine est élevé, proche de 100 micromolaire.

Nous venons de vous montrer la procédure de transplantation rénale chez la souris. Bien que cette procédure soit techniquement difficile, notre laboratoire a obtenu de très bons résultats dans sa réalisation. Voilà donc tout.

Merci d'avoir regardé et bonne chance avec vos expériences.