Name: Modélisation colite murin en utilisant du sulfate de sodium Dextran (DSS) (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-01-19T17:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 39 s
Description: Apprenez à induire une colite aiguë chez la souris avec du DSS dans l'eau de boisson, puis à préparer les tissus coliques pour analyse histologique. Cette méthode standardisée permet d'étudier les mécanismes de la maladie inflammatoire de l'intestin.

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Le financement accordé par le NIH (1 K08 DK080221-01) et les fonds de développement institutionnel Vanderbilt.

Partie 1: modèle de colite blessures-Réparation <ol><li> Poids à l'inclusion devrait être obtenue pour chaque souris avant de commencer le traitement du MAS. </li><li> Faites un 3% (p / v) Sulfate de Dextran Sodium solution de sel dans l'eau et le filtre avec un filtre de 0,45 um d'acétate de cellulose. </li><li> Remplacer l'eau potable dans la cage de la souris avec la solution DSS 3% pendant quatre jours. Les souris ne devraient pas avoir accès à toute autre source d'eau (à savoir l'exclusion des conseils mis sur les systèmes d'arrosage automatique). </li><li> Le quatrième jour, remplacer la solution SSD avec de l'eau pour une période supplémentaire de trois jours, permettant une certaine reprise du côlon épithéliales. La souris devrait être pesé sur quatre jours afin de quantifier les conséquences systémiques de la colite. La perte de poids est commun avec des blessures graves. </li><li> Au jour 7, peser et le sacrifice des souris. Les souris peuvent être euthanasiés par surdose par inhalation d'isoflurane, ou d'autres institutionnellement, IACUC méthodes approuvées. </li></ol> Partie 2: autopsie et la récolte de Colon <ol><li> Exposer la partie ventrale de la souris et les jambes sécurisé afin d'assurer un libre accès à l'abdomen. Mouiller l'abdomen complètement avec 70% d'éthanol. </li><li> Saisissez la ligne médiane de l'abdomen avec une pince tissus et s'étendent vers le haut donc tentes de la peau. Utilisez des ciseaux à pointe fine pour inciser l'abdomen exposant ainsi le contenu abdominal. Prolonger l'incision à la pointe de l'appendice xiphoïde à la ligne médiane puis s'étendent le long de la face inférieure de la marge côtière bilatéralement. </li><li> Identifier l'intestin grêle, le caecum et du côlon. Soigneusement disséquer / taquiner le côlon du mésentère entoure. Transect du côlon profonde dans le bassin afin de libérer le côlon distal et du rectum. Transect du côlon à la marge colonocecal pour libérer le côlon proximal. Des précautions doivent être prises lors de ce processus pour ne pas endommager le colon que le nettoyage du côlon sera problématique si la perforation se produit. </li><li> En utilisant une aiguille d'alimentation 20G et une seringue de 10 ml, intuber et rincer le côlon avec PBS glacé jusqu'à la éluat est totalement claire des selles. </li><li> À ce stade, si l'analyse macroscopique avec un microscope à dissection est souhaitée, les colons peuvent être fixés comme «saucisses». Si l'analyse histologique est seulement désiré que de procéder à la partie 4 «Faire Rolls suisse pour l'analyse histologique de la colite aiguë". </li></ol> Partie 3: Traitement de «saucisses» pour l'analyse macroscopique de l'ensemble du côlon <ol><li> Il est important de maintenir l'orientation correcte du côlon, par conséquent, garder l'extrémité distale du côlon proche de l'opérateur. Coupez deux morceaux de suture non résorbable (SP116 1,5 soie tressée métriques), l'un d'environ 1 pouce de longueur, les 2 autres pouces. </li><li> Utilisez le morceau de 2 pouces de suture pour attacher l'extrémité distale aussi près que possible de la marge, tout en conservant une bonne étanchéité. </li><li> Placer une aiguille 20G d'alimentation contenant 5 ml de 10% tamponné phosphate de formol dans l'extrémité proximale du côlon. Librement attacher le morceau restant de suture immédiatement en amont de l'ampoule de l'aiguille d'alimentation. Saisir fermement le côlon au niveau du bulbe de l'aiguille d'alimentation et laisser infuser le formol jusqu'à ce que le colon est élargi. Serrez le noeud de la suture que vous retirez l'aiguille d'alimentation, laissant ainsi la infuse, du côlon élargi comme une "saucisse". </li><li> Remplir un tube de 15 ml conique avec 10% tamponnée de phosphate de formol et le lieu du côlon dans le tube. Correction pour les 24 heures. </li><li> Décanter le formol et le remplacer par EtOH à 70% pour un 24 heures supplémentaires. (Colons peut être stockée dans EtOH à 70% indéfiniment à température ambiante.) </li><li> Retirez le côlon du tube conique et couper les cordes à chaque extrémité avec un scalpel, en faisant attention à ne pas endommager le côlon. Rappelez-vous que l'extrémité distale a la plus longue ficelle. Couper longitudinalement à partir de l'extrémité distale à l'extrémité proximale du côlon de sorte qu'il forme une longue feuille. À ce stade, le côlon peut être considérée sous un microscope à dissection. </li></ol> Partie 4: Rendre Rolls suisse pour l'analyse histologique de la colite aiguë <ol><li> Il est important de maintenir l'orientation correcte du côlon, par conséquent, garder l'extrémité distale du côlon proche de l'opérateur. </li><li> Mesurez la longueur du côlon. Cette métrique est un autre indicateur de la gravité des blessures. Colite augmente l'œdème et raccourcit la durée du côlon globale. </li><li> En utilisant des ciseaux à pointe fine, incisez longitudinalement de distal à l'extrémité proximale du côlon. Utilisez une pince à pointe bien à saisir un des bords de l'incision et ouverte latéralement travailler votre chemin distal-&gt; proximale, affichant ainsi le colon comme un drap plat. </li><li> Rouler le côlon nécessite une paire de pinces et d'une technique à deux mains. Saisissez l'un des bords de la marge distale avec une pince. Passez à rouler de façon séquentielle du côlon en tournant et en libérant les pinces de procéder à la marge proximale. Générant ainsi une spirale avec une troisième dimension ou "Roll suisse».Pour maintenir la forme enroulée, saisir le rouler fermement avec une pince et il transect avec une aiguille 27G1 / 2. Fixez l'aiguille par flexion de l'aiguille à sa sortie du rouleau. </li><li> Placez le rouleau dans une cassette tissus étiquetés correctement et placez dans un pot de 10% tamponnée de phosphate de formol à température ambiante pendant 24 heures afin d'assurer la fixation des tissus. </li><li> Décanter le formol et le remplacer par EtOH à 70% pour un 24 heures supplémentaires. (Colons peut être stockée dans EtOH à 70% indéfiniment à température ambiante.) </li><li> Une fois l'échantillon a été fixé, il peut être inclus en paraffine, coupés et montés sur des lames pour l'analyse histologique. </li></ol> Partie 5: Résultats Représentant Le modèle SSD pour la colite aiguë permet au chercheur d'obtenir, corriger et analyser un colon qui la colite aiguë modèles. Quand le rouleau suisses est coupé et monté, il devrait former une tranche représentative de la totalité du côlon en cas de roulement correctement (figure 1). Le rouleau peut être montée colorés avec H &amp; E, afin de déterminer l'étendue des dommages au côlon, de la partie distale (à l'intérieur) fin à la partie proximale (extérieur) fin (figure 2). L'immunohistochimie peut également être effectuée sur la liste suisse pour identifier et quantifier des infiltrats inflammatoires. Si la méthode la saucisse a été effectuée correctement, le côlon fixe sera dilaté et toute la surface des muqueuses peuvent être facilement manipulées et visualisées sous le microscope à dissection (figure 3). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1652/1652fig1.jpg"><img src="/files/ftp_upload/1652/1652fig1tmb.jpg" alt="Figure 1" border="0" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figure 1"></a> Figure 1. Le bien-exécuté "roulé". (A) Le côlon est roulé de la partie distale de l'extrémité proximale, sectionné avec une aiguille et fixés par flexion de l'extrémité de l'aiguille. Il est ensuite placé dans une cassette de tissu pour la fixation. (B) H &amp; E teinté section 5 um d'un rouleau Swiss made dans le côlon d'une souris traitée avec DSS (d = p = côlon distal du côlon proximal). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1652/1652fig2.jpg"><img src="/files/ftp_upload/1652/1652fig2tmb.jpg" alt="Figure 2" border="0" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figure 2"></a> Figure 2. Virgules DSS traités montrent des signes de colite aiguë. Inflammation des dommages et la crypte sont apparentes dans le côlon DSS-traités par rapport à un contrôle de l'eau traitée. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1652/1652fig3.jpg"><img src="/files/ftp_upload/1652/1652fig3tmb.jpg" alt="Figure 3" border="0" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figure 3"></a> Figure 3. Un exemple d'une «saucisse». La saucisse infusé avec du formol et complètement développé. Un léger angle seront présents secondaire à la courbure naturelle du côlon. La saucisse a ouvert doit être à plat.

<ol><li>Okayasu, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+method+in+the+induction+of+reliable+experimental+acute+and+chronic+ulcerative+colitis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">A novel method in the induction of reliable experimental acute and chronic ulcerative colitis in mice.</a> Gastroenterology. 98 (3), 694-702 (1990).</li>
<li>Martinez, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deletion+of+Mtgr1+sensitizes+the+colonic+epithelium+to+dextran+sodium+sulfate-induced+colitis%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Deletion of Mtgr1 sensitizes the colonic epithelium to dextran sodium sulfate-induced colitis.</a> Gastroenterology. 131 (2), 579-588 (2006).</li>
<li>Moolenbeek, C., Ruitenberg, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+%22Swiss+roll%22%3A+a+simple+technique+for+histological+studies+of+the+rodent+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim%22%5BJournal%5D)">The "Swiss roll": a simple technique for histological studies of the rodent intestine.</a> Lab Anim. 15 (1), 57-59 (1981).</li>
<li>Mahler, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+susceptibility+of+inbred+mouse+strains+to+dextran+sulfate+sodium-induced+colitis%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Differential susceptibility of inbred mouse strains to dextran sulfate sodium-induced colitis.</a> Am J Physiol. 274, G544-551 (1998).</li>
<li>Aharoni, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunomodulatory+therapeutic+effect+of+glatiramer+acetate+on+several+murine+models+of+inflammatory+bowel+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pharmacol+Exp+Ther%22%5BJournal%5D)">Immunomodulatory therapeutic effect of glatiramer acetate on several murine models of inflammatory bowel disease.</a> J Pharmacol Exp Ther. 318 (1), 68-78 (2006).</li>
<li>Hahm, K. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+of+transforming+growth+factor+beta+signalling+in+the+intestine+contributes+to+tissue+injury+in+inflammatory+bowel+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Loss of transforming growth factor beta signalling in the intestine contributes to tissue injury in inflammatory bowel disease.</a> Gut. 49 (2), 190-198 (2001).</li>
<li>Green, B. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adrenergic+modulation+of+Escherichia+coli+O157%3AH7+adherence+to+the+colonic+mucosa%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Gastrointest+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">Adrenergic modulation of Escherichia coli O157:H7 adherence to the colonic mucosa.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 287 (6), G1238-1246 (2004).</li>
<li>Dieleman, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+experimental+colitis+induced+by+dextran+sulphate+sodium+%28DSS%29+is+characterized+by+Th1+and+Th2+cytokines%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Exp+Immunol%22%5BJournal%5D)">Chronic experimental colitis induced by dextran sulphate sodium (DSS) is characterized by Th1 and Th2 cytokines.</a> Clin Exp Immunol. 114 (3), 385-391 (1998).</li>
</ol>

Expériences sur les animaux ont été effectuées en conformité avec les directives et les règlements stipulés par Vanderbilt IACUC.

Ce protocole peut être modifié pour modèle de lésion aiguë, blessure-réparation, ou chronique du côlon processus blessures. Modification des traumatismes aigus: Lib DSS ad traitement pendant 4-6 jours, suivie par le sacrifice immédiat Blessure-Réparation de modification: Blessure avec 4-6 jours de traitement DSS suivie par la période de récupération de 3-4 jours et le sacrifice (comme décrit dans le protocole ci...

<table><tbody><tr><td>Sulfate de dextrane, sel sodique</td><td>USB Corp., Affymetrix</td><td>9011-18-1</td><td>masse moléculaire 40 000-50 000</td></tr><tr><td>Formol tamponné à 10 %, phosphate</td><td>Fisher Scientific</td><td>SF100-4</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane, USP</td><td>Phoenix Pharmaceuticals, Inc.</td><td>NDC 57319-474-06</td><td></td></tr><tr><td>Cassettes TISSUE PATH Macrosette</td><td>Fisher Scientific</td><td>15182706</td><td></td></tr><tr><td>Seringue BD de 10 ml</td><td>BD Biosciences</td><td>309604</td><td></td></tr><tr><td>Alcool éthylique</td><td>Pharmco-AAPER</td><td>E190</td><td>Diluer à 70 % avec de l'eau distillée</td></tr><tr><td>Aiguille droite de 20G pour alimentation</td><td>VWR international</td><td>20068-612</td><td></td></tr><tr><td>Aiguille PrecisionGlide 27G1/2</td><td>BD Biosciences</td><td>305109</td><td></td></tr><tr><td>Ciseaux de dissection à extrémité pointue/émoussée</td><td>VWR international</td><td>82027-588</td><td></td></tr><tr><td>Pinces de Waugh</td><td>VWR international</td><td>82027-428</td><td></td></tr><tr><td>Fil de suture non absorbable</td><td>LOOK Surgical</td><td>SP116</td><td></td></tr><tr><td>Papier buvard Whatman</td><td>VWR international</td><td>28298-020</td><td>Couper selon les besoins</td></tr><tr><td>Filtre en acétate de cellulose sans surfactant (SFCA), Nalgene</td><td>Cole-Parmer</td><td>EW-06731-2</td><td></td></tr><tr><td>Pièce à main numérique en composite de fibres de carbone</td><td>Fisher Scientific</td><td>15-007-958</td><td></td></tr></tbody></table>

modélisation colite murin en utilisant du sulfate de sodium dextran (dss)

Murine Colitis Modeling using Dextran Sulfate Sodium (DSS)

Colite peuvent survenir des infections virales ou bactériennes, ischémique ou de troubles auto-immunes; colite ulcéreuse et plus particulièrement la variante du côlon de la maladie de Crohn - maladie de Crohn. La colite aiguë peuvent présenter des douleurs abdominales et une distension, une malabsorption, diarrhée, rectorragies et de mucus dans les selles. Nous commençons à comprendre les interactions complexes entre l&#39;environnement, la génétique et le dysfonctionnement de la barrière épithéliale inflammatoire modèles de maladies animales et l&#39;intestin de colite ont été essentielles pour faire progresser notre compréhension de cette maladie. Un modèle populaire implique complétant l&#39;eau potable des souris du sulfate de sodium à faible poids moléculaire Dextran (DSS), entraînant des dommages épithéliaux et une réponse robuste inflammatoires dans le côlon de plusieurs jours<sup&gt; 1</sup&gt;. Variantes de cette approche peut être utilisée pour modéliser une blessure aiguë, une blessure aiguë suivie de réparation, et des cycles répétés de DSS entrecoupées de récupération de modélisation des maladies inflammatoires chroniques<sup&gt; 2</sup&gt;. Après un seul traitement de quatre jours de DSS 3% dans l&#39;eau potable, les souris montrent des signes de colite aiguë, y compris la perte de poids, selles sanglantes, et la diarrhée. Les souris sont euthanasiés à la fin de la cure et à deux points autopsie disséqués sont traitées et peuvent être «Swiss laminé&quot;<sup&gt; 3</sup&gt; Pour permettre une analyse microscopique de la totalité du côlon ou infusée avec du formol comme «saucisses» pour permettre une analyse macroscopique. Tissu est ensuite inclus dans la paraffine, sectionnées et colorées pour examen histologique.

Dextran sulfate de sodium (DSS) administré dans l&#39;eau potable est un modèle murin établie blessures inflammatoires de colite aiguë. Ce protocole décrit la méthode pour le traitement de DSS et la préparation des tissus.

Modélisation colite murin en utilisant du sulfate de sodium Dextran (DSS)

La colite peut résulter d'infections virales ou bactériennes, d'une insulte ischémique ou de troubles auto-immuns, notamment la rectocolite hémorragique et la variante colique de...

Les souris reçoivent du DSS à 3 % à volonté pendant quatre jours. Alors que le poids corporel ainsi que la présence de diarrhée et de sang dans les selles sont enregistrés quotidiennement, le DSS est remplacé par de l'eau stérilisée à l'autoclave après le quatrième jour. Après trois jours d'eau, les souris sont euthanasiées et leurs côlons sont prélevés.Les côlons sont mesurés et pesés. Ensuite, les côlons sont soit enroulés en forme de « rouleaux suisses », soit façonnés en saucisses, puis examinés au microscope. Cet article vidéo démontrera la récolte et le traitement des côlons dans un modèle murin de colite.Cette procédure est utilisée pour étudier la colite dans le laboratoire du Dr Christopher Williams du Département de biologie du cancer de l'Université Vanderbilt, avant le début du traitement par le sulfate de dextrane sodique. Des poids de référence sont obtenus tout au long de l'expérience. Des poids quotidiens sont relevés après avoir pesé les souris, puis on prépare une solution de sulfate de dextrane sodique (DSS) à 3 % poids par volume dans l'eau.Le DSS doit être de faible masse moléculaire pour que ce modèle soit efficace ; préparez suffisamment de solution de DSS pour remplir une bouteille d'eau pour chaque cage de souris, puis filtrez la solution à l'aide d'un filtre en acétate de cellulose de 0,45 micromètre. Remplacez la bouteille d'eau de boisson dans la cage des souris par une bouteille contenant une solution de DSS à 3 %. Si votre établissement utilise un système d'arrosage automatisé, placez des embouts d'exclusion sur les becs verseurs afin de garantir que les souris n'aient accès à aucune autre source d'eau.Après quatre jours, les souris sont pesées à nouveau afin de quantifier les conséquences systémiques de la colite. La perte de poids est fréquente en cas de lésion sévère, mais peut ne pas être apparente pendant encore plusieurs jours le jour même. Au jour quatre, remplacez la solution de DSS par de l'eau pendant trois jours supplémentaires pour permettre une certaine récupération de l'épithélium colique.Trois jours plus tard, au jour sept, les souris sont à nouveau pesées. Le côlon peut alors être prélevé sur les souris euthanasiées, comme indiqué dans la section suivante. Pour prélever le côlon, exposez la face ventrale de la souris euthanasiée afin d'assurer un accès sans entrave à l'abdomen.Humidifiez complètement l'abdomen avec de l'éthanol à 70 %. Saisissez la ligne médiane de l'abdomen avec une pince à tissus et soulevez-la. Tendez ainsi la peau à l’aide de ciseaux fins.Inciser l'abdomen pour exposer le contenu abdominal. Prolonger l'incision jusqu'à l'extrémité du processus xiphoïde au niveau de la ligne médiane, puis poursuivre le long de l'aspect inférieur des bords costaux de manière bilatérale. Identifier l'intestin grêle, le caecum et le côlon.Disséquez soigneusement le côlon en le séparant du mésentère environnant. Ensuite, sectionnez le côlon pour l'abaisser vers le pelvis afin de libérer le côlon distal du rectum.Il convient de faire attention pour ne couper aucune artère ni veine. De plus, sachez que le côlon peut se déchirer facilement. Retirez donc délicatement le côlon du mésentère.Transecter le côlon au niveau de la marge de séquelle colique afin de libérer le côlon proximal. Retirer le côlon en totalité et, à l’aide d’une sonde d’alimentation de calibre 20 et d’une seringue de 10 millilitres, intuber et rincer le côlon avec du PBS glacé jusqu’à ce que l’EIT soit complètement débarrassé des selles. Il est important de maintenir l’orientation correcte du côlon en gardant l’extrémité distale du côlon la plus proche de vous.Commencez par mesurer la longueur du côlon à l’aide d’un pied à coulisse numérique. La longueur du côlon constitue un autre indicateur de la gravité de la lésion. La colite augmente l’œdème et raccourcit la longueur totale du côlon.À ce stade, les côlons prélevés peuvent être traités soit sous forme de saucisses pour une analyse macroscopique, soit en rouleau suisse pour une analyse histologique de la colite aiguë. Nous démontrerons ces techniques dans les sections suivantes pour traiter le côlon sous forme de saucisse. Pour l'analyse macroscopique de l'ensemble du côlon, il est important de maintenir l'orientation correcte du côlon. Par conséquent, gardez l'extrémité distale du côlon la plus proche de vous.Coupez deux morceaux de suture non résorbable, l'un d'environ un pouce de longueur et l'autre de deux pouces de longueur. Utilisez le morceau de suture de deux pouces pour ligaturer l'extrémité distale du côlon aussi près que possible de la marge tout en maintenant un bon étanchéité. Ensuite, insérez une aiguille d'alimentation de calibre 20 contenant cinq millilitres de formol tamponné au phosphate à 10 % dans l'extrémité proximale du côlon.Faire un nœud lâche avec le morceau restant de suture immédiatement en position proximale par rapport à la boule de l'aiguille d'alimentation. Saisir ensuite fermement le côlon au niveau de la boule de l'aiguille d'alimentation et injecter une quantité suffisante de formol afin de garantir le gonflement du côlon. Serrer le nœud de la suture en retirant l'aiguille d'alimentation, laissant ainsi le côlon gonflé par l'injection.En tant que saucisse, remplir un tube conique de 15 millilitres avec du formol tamponné à 10 %, phosphate, et étiqueter le tube. Placer le côlon dans le tube et fixer pendant 24 heures. Après 24 heures, verser le formol dans un contenant approprié pour déchets et le remplacer par de l'éthanol à 70 % pendant encore 24 heures.Les côlons peuvent être conservés indéfiniment à température ambiante dans de l'éthanol à 70 %. Lorsque vous êtes prêt à analyser le côlon, retirez-le du tube conique. Coupez les ficelles à chaque extrémité à l’aide d’un scalpel en prenant soin de ne pas endommager le côlon.Rappelez-vous que l'extrémité distale possède le morceau de ficelle le plus long. Incisez longitudinalement le côlon de l'extrémité distale vers l'extrémité proximale afin d'obtenir une longue lamelle. Le côlon peut désormais être observé au microscope stéréoscopique.Couper le côlon longitudinalement et l’étaler comme une feuille plate. Le roulage du côlon nécessite deux paires de forceps et une technique à deux mains. Saisir les deux bords latéraux de la marge distale du côlon avec les forceps, puis rouler successivement le côlon en faisant pivoter et en relâchant les forceps en progressant vers la marge proximale, formant ainsi une spirale en trois dimensions, ou « Swiss roll ».Si le côlon adhère au papier Watman, humidifier le papier et le côlon avec une petite quantité de PBS pour en maintenir la forme. Saisir fermement le rouleau avec une pince et le sectionner à l’aide d’une aiguille de calibre 27 et demi. Maintenir le rouleau en place en courbant l’aiguille lorsqu’elle sort du rouleau.Maintenant, placez le rouleau dans une cassette pour tissus étiquetée et mettez la cassette dans un bocal contenant du formol tamponné à 10 %. Laissez à température ambiante pendant 24 heures pour fixer le tissu. Après 24 heures, versez le formol et remplacez-le par de l’éthanol à 70 % pendant quatre heures supplémentaires.Les côlons peuvent être conservés indéfiniment à température ambiante dans de l'éthanol à 70 %. Ce modèle permet au chercheur d'obtenir, de fixer et d'analyser les côlons, ce qui autorise l'analyse de la gravité de la colite. Pour une analyse macroscopique de l'ensemble du côlon, celui-ci peut être traité comme une saucisse qui est perfusée avec du formol et complètement dilatée.La saucisse ouverte doit être à plat. Si la méthode de la saucisse a été correctement réalisée, le côlon fixé sera dilaté et toute la surface muqueuse pourra être facilement manipulée et observée au microscope stéréoscopique. Pour l'analyse histologique, le côlon peut être préparé selon la technique du rouleau suisse.Le rouleau est fixé à l'aide d'une aiguille et placé dans une cassette histologique pour la fixation. Lorsque le rouleau est coupé et monté, il doit former une coupe représentative de tout le côlon s'il est correctement enroulé ; des sections du rouleau suisse peuvent être colorées à l'hématine et à l'ASIN afin de déterminer l'importance des lésions coliques. N'oubliez pas que l'extrémité distale du côlon se trouve au centre du rouleau sur la lame.Dans cet exemple, l'inflammation et les lésions cryptiques sont apparentes dans le côlon traité au DSS par rapport à un témoin traité à l'eau. Nous venons de vous montrer comment récolter et traiter les côlons à partir d'un modèle murin de colite aiguë. Lors de la réalisation de cette procédure, il est important d'être bien organisé avant la mise à mort de l'animal.Les souris, par exemple, disposent de tous les tubes et cassettes étiquetés pour chaque souris, ainsi que de tous les outils et réactifs facilement accessibles. En outre, tenez des registres détaillés du poids des souris et de la longueur du côlon. Enfin, assurez-vous d'avoir prévu suffisamment de temps pour le traitement.Il faut généralement 15 minutes par souris pour un débutant et de six à huit minutes pour une personne plus expérimentée dans cette technique.

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Biologie

Des modèles expérimentaux de maladies inflammatoires de l'intestin nous ont permis d'examiner le complexe innée et adaptative des réponses immunitaires associées à la pathogenèse. Utiliser score histologique, la quantification des cytokines pro-inflammatoires et de l'activité myéloperoxydase, on peut commencer à évaluer ces réponses observée dans la maladie intestinale inflammatoire.

Enquêter inflammation intestinale induite par DSS modèle des MICI

Nous démontrons un protocole dans lequel l'administration de l'agent génotoxique azoxyméthane (AOM), suivie de trois cycles de sodium pro-inflammatoire du sulfate de dextran (DSS) rapidement et génère constamment des tumeurs du côlon chez des souris présentant des similitudes morphologiques et moléculaires à celles observées dans la colite humaine associée à un cancer.

Modélisation colite cancer associé avec azoxyméthane (OMA) et de sodium Sulfate de Dextran (DSS)

Cette vidéo présente une technique permettant de générer un modèle murin de colite induit par des produits chimiques, une maladie inflammatoire de l’intestin. La souris est autorisée à consommer une solution de sulfate de sodium de dextran (DSS) pendant une durée adéquate. Lors de la consommation, le DSS endommage la barrière de mucus et de la couche épithéliale dans le côlon, permettant aux microbes intestinaux de pénétrer dans les tissus sous-jacents - où ils sont détectés par les cellules...

Technique pour générer un modèle murin de colite induite par le sulfate de dextran sodique

Cette vidéo présente la méthode de coloration à l’hématoxyline et à l’éosine (H&amp;E) pour évaluer les lésions du côlon dans un modèle murin de colite induite par le DSS - une maladie inflammatoire de l’intestin. Lors de l’isolement du côlon d’une souris traitée au DSS et de l’obtention de sections du tissu, la coloration H&amp;E des sections aide à identifier les lésions tissulaires induites par l’inflammation.

Coloration à l’hématoxyline et à l’éosine pour évaluer les lésions du côlon dans la colite induite par le DSS

DNBS / TNBS colite induite propose une méthode alternative et peu coûteuse pour étudier la pathobiologie de la maladie inflammatoire de l'intestin. Le protocole décrit dans ce document décrit l'application réussie de DNBS pour induire la colite chez les souris et les rats et permet d'étudier en profondeur les réponses intestinales médiés par l'hôte.

Modèles DNBS / TNBS colite: Fournir connaissances sur les maladies inflammatoires de l&#39;intestin et des effets de graisses alimentaires

Colostomie distale murin fournit un modèle murin pour la colite détournement humaine, une colite lymphocytaire principalement dans le segment du côlon exclus du flux de matières fécal.

Murine colostomie distale, un nouveau modèle de colite détournement chez les souris C57BL/6

Manque de normalisation pour le traitement des tissus murins réduit la qualité de l’analyse histopathologique murin par rapport aux spécimens humains. Nous présentons ici un protocole pour effectuer l’examen histopathologique des tissus coliques murines, enflammées et inflammθe, à démontrer la faisabilité des systèmes robotiques couramment utilisées pour le traitement et l’incorporation des échantillons humains.

À l’aide de systèmes robotiques pour traiter et intégrer coliques Murine échantillons pour Analyses histologiques

Le protocole présenté décrit un déplacement chirurgical facile de l'appendice (patch caecal) dans une souris suivie de l'induction du cancer colorectal associé à la maladie intestinale inflammatoire. Ce modèle d'appendicectomie de murine permet d'investigation du rôle biologique de l'appendice dans la pathogénie de la maladie gastro-intestinale humaine.

Modèle d'appendicectomie de Murine de cancer colorectal associé de colite chronique par localisation précise du patch caecal

La notation systématique de l’inflammation intestinale utilisant un système informatique-aidé libre est un outil puissant pour comparer quantitativement des changements histopathologiques dans des modèles de colite caractérisés par la présence des ulcères et des changements inflammatoires. L’évaluation histologique de score de colite renforce des observations cliniques et facilite l’interprétation de données.

Analyse systématique de notation pour l’inflammation intestinale dans un modèle de colite induite par le sulfate de sodium murine dextran

Charles Taylor et John Marshall expliquer l'utilité de la modélisation mathématique pour évaluer l'efficacité de la stratégie de remplacement de la population. Insight est donnée sur la façon dont les modèles computationnels peuvent fournir des informations sur la dynamique des populations de moustiques et la propagation des éléments transposables dans la sous-espèce A. gambiae. Les considérations éthiques de la libération des moustiques génétiquement modifiés dans l'état sauvage sont discutés.

Prédire l&#39;efficacité de la stratégie de remplacement de la population utilisant la modélisation mathématique

Apprenez à induire une colite aiguë chez la souris avec du DSS dans l'eau de boisson, puis à préparer les tissus coliques pour analyse histologique. Cette méthode standardisée permet d'étudier les mécanismes de la maladie inflammatoire de l'intestin.

Modélisation colite murin en utilisant du sulfate de sodium Dextran (DSS)

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