Name: Modèle murin Bioluminescent tumeurs hépatiques (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-07-17T17:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 23 s
Description: Découvrez une technique chirurgicale pour induire des tumeurs hépatiques bioluminescentes orthotopiques chez la souris. Cette méthode permet l'analyse de la croissance tumorale par imagerie luminescente in vivo pour la recherche oncologique.

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Ce travail a été financé par le Cork South Victoria Infirmary Hospital de l&#39;Université de fonds du sein, cancer de la Société irlandaise (CRI07TAN) et le Centre de recherche contre le cancer Cork. Ligne de cellules du poumon de Lewis exprimant de façon stable la luciférase a été un cadeau du genre Dr. Karin Jooss, Cell Genesys, Inc, San Francisco, USA.

Présentation Le foie est souvent le premier site de la maladie métastatique et peut être le seul site de dissémination dans autant que 30 à 40% des patients ayant une maladie avancée. Toutefois les options pour traiter des tumeurs hépatiques métastatiques sont rares avec une minorité de patients appropriés pour la résection et seulement 23% des intervenants majeurs aux agents chimiothérapeutiques. La recherche préclinique dans ce domaine ont été limitées par l'absence d'un modèle de souris adaptée à l'étude des maladies hépatiques isolées. Nous décrivons une approche split-rate qui peuvent être utilisées pour déterminer de manière sûre uniforme, métastases hépatiques diffuses. La résection de cette moitié de la rate permet d'éviter les conséquences de la croissance tumorale de la rate et l'autre moitié de la rate est retourné avec une circulation portale intacte pour maintenir spléniques immunitaires protectrices. Le modèle que nous décrivons est assez simple à réaliser et qui peut être fait rapidement par une seule incision. Les propriétés bioluminescentes de la lignée cellulaire tumorale permet une quantification précise de la réponse au traitement, sans sacrifice d'animaux. Protocole Préparation des cellules I. <ol><li> Cellules de carcinome pulmonaire de Lewis sont cultivés Dulbecco milieu modifié essentielles complétée par du sérum de veau foetal à 10% à 37 ° C, 5% de CO 2 et récoltées par trypsinisation lorsque les sous-confluentes. </li><li> Les cellules ont été comptées en utilisant un NucleoCounter (chimio-metec, Danemark) et une suspension cellulaire unique de 1 x 10 6 cellules dans 200 ul a été préparé dans le sérum des médias libres. </li></ol> II. Préparation de la souris Note: Toutes les procédures ont été approuvées par le comité d'éthique de l'Université de Cork. Dans notre laboratoire, nous utilisons des anesthésiques injectables pour anesthésier la souris, ou alternativement, on peut utiliser des anesthésiques inhalés pour atteindre le même effet. La souche de souris, nous avons utilisé est le poil MF1 nu / nu souche obtenue à partir Harlan Laboratories (Oxfordshire, Angleterre). Femme MF1 souris nu / nu pesant de 16 à 22 g et de 6-8 semaines d'âge ont été inclus dans cette expérience. D'autres souches comme le C57 et Balb / c peuvent également être utilisés avec les lignées cellulaires tumorales. <ol><li> L'anesthésie a été administré par injection intrapéritonéale de 100 ul de 1,5 mg de kétamine et de xylazine 300 ug. </li><li> La profondeur de l'anesthésie est évaluée à l'aide pincement de l'orteil. Il devrait y avoir aucun réflexe de retrait avec pincement de l'orteil. </li><li> La souris est positionné correctement anesthésiés et enregistrée sur un coussin chauffant. </li><li> L'abdomen est préparée avec une solution bétadine à 10%. </li><li> L'abdomen et du site opératoire sont drapées d'une manière stérile. </li></ol> III. Incision abdominale <ol><li> Une petite incision sous-costale est faite dans la peau. </li><li> L'incision est étendue à 2-3 cm. </li><li> La musculature de la paroi abdominale ont été divisés et la cavité péritonéale est entré. </li></ol> IV. L'exposition et la Division de la rate <ol><li> La rate est mobilisé et doucement extériorisé sur une gaze stérile, pré-coupés. </li><li> Deux 4-0 ligatures vicryl sont attachés autour du corps mi de la rate. </li><li> Spleen est divisé entre les deux ligatures la création de deux hémi-rate. </li></ol> Injection V. de cellules dans le Hemi-rate <ol><li> Un G 27 est utilisée pour injecter un volume de 100 ul de cellules dans un hémi-rate. </li><li> Les cellules tumorales sont autorisés à drainer le foie pendant dix minutes fournissant suffisamment de temps pour la majorité des cellules injectées pour atteindre le foie. </li></ol> VI. Excision de Hemi-rate, la fermeture abdominale et de récupération <ol><li> L'injection de l'hémi-rate est excisée. </li><li> L'autre hémi-rate est retourné à la cavité abdominale. </li><li> La couche musculaire est fermé par suture de PDS 4-0 en utilisant un simple point en marche. </li><li> La peau abdominale est fermée avec Prolène 4-0 points de suture à l'aide interrompue. </li><li> Fluide bolus est administré et l'analgésie postopératoire, Carpofen (5 mg / kg) est administré par injection IP pendant 24 heures après la chirurgie. </li><li> La souris est autorisé à remettre de l'anesthésie </li></ol> VII. IVIS corps entier Bioluminescent Imaging <ol><li> La souris est anesthésiée à l'aide anesthésique injectable. </li><li> Substrat luciférine est donnée par injection intra-péritonéale dix minutes avant l'imagerie </li><li> Les souris sont placées sur la scène et imagé pour 3 min à l'aide du système IVIS imagerie du corps entier </li><li> Luminescence du foie peut être mesurée en utilisant une région d'un outil d'intérêt </li></ol> VIII. L'exposition de foie de souris <ol><li> La souris est anesthésiée à l'aide anesthésique injectable. </li><li> Une incision abdominale sur le toit permet la visualisation des métastases hépatiques diffuses in vivo. </li><li> La souris est euthanasié par dislocation cervicale et le foie peut être excisée pour une analyse ultérieure. </li></ol>_upload/1977/1977fig1.jpg "alt =" Figure 1 "/&gt; Figure 1. Fraîchement excisés traités murines et tumorales infiltrées foies. <img src="/files/ftp_upload/1977/1977fig2.jpg" alt="Figure 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figure 2"> Figure 2. Cinétique de croissance de la tumeur hépatique comme en témoigne l'imagerie IVIS corps tout entier.

<ol><li>Kasuya, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+subcutaneous+spleen+reservoir+for+multiple+portal+venous+injections+to+treat+liver+malignancies%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Mouse models of subcutaneous spleen reservoir for multiple portal venous injections to treat liver malignancies.</a> Cancer Res. 65, 3823-3827 (2005).</li>
<li>Liu, Q. Z., Tuo, C. W., Wang, B., Wu, B. Q., Zhang, Y. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liver+metastasis+models+of+human+colorectal+carcinoma+established+in+nude+mice+by+orthotopic+transplantation+and+their+biologic+characteristic%5BTitle%5D)+AND+%22World+J+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Liver metastasis models of human colorectal carcinoma established in nude mice by orthotopic transplantation and their biologic characteristic.</a> World J Gastroenterol. 4, 409-411 (1998).</li>
<li>Li, Z. Y., Ni, S., Yang, X., Kiviat, N., Lieber, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Xenograft+models+for+liver+metastasis%3A+Relationship+between+tumor+morphology+and+adenovirus+vector+transduction%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">Xenograft models for liver metastasis: Relationship between tumor morphology and adenovirus vector transduction.</a> Mol Ther. 9, 650-657 (2004).</li>
<li>Cashman, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+gene+therapy+as+a+neoadjuvant+to+surgical+excision+to+control+metastatic+cancers%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Lett%22%5BJournal%5D)">Immune gene therapy as a neoadjuvant to surgical excision to control metastatic cancers.</a> Cancer Lett. , (2008).</li>
</ol>

Le développement de la fiabilité des modèles in vivo pour l&#39;étude des métastases hépatiques est de plus en plus important avec l&#39;avènement de nouvelles stratégies thérapeutiques. Pour l&#39;étude précise de nouvelles stratégies, des modèles animaux devrait être relativement facile à réaliser, forment un nombre significatif de métastases, impliquer toutes les étapes de la cascade métastatique et ont un système rapporteur qui permet la détection et le comptage d&#39;un nombre limité de cellules m...

<table><tbody><tr><td>DMEM</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D6429</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D8537</td><td></td></tr><tr><td>Kétamine</td><td>V&amp;eacute;toquinol</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Xylazine</td><td>V&amp;eacute;toquinol</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Carprofène</td><td>V&amp;eacute;toquinol</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vidène</td><td>Ecolab</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fil de suture Vicryl 4-0</td><td>Ethicon Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fil de suture PDS 4-0</td><td>Ethicon Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fil de suture Prolene 4-0</td><td>Ethicon Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Luciférine de luciole</td><td>Biosynth International, Inc</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

modèle murin bioluminescent tumeurs hépatiques

Murine Bioluminescent Hepatic Tumour Model

Cette vidéo décrit l&#39;établissement de métastases hépatiques dans un modèle de souris qui peut ensuite être analysé par imagerie par bioluminescence. Les cellules tumorales sont administrés spécifiquement dans le foie pour induire une tumeur hépatique localisée, via la mobilisation de la rate et le fractionnement en deux, laissant intact le pédicule vasculaire pour chaque moitié de la rate. Cellules de carcinome pulmonaire de Lewis qui expriment constitutivement le gène luciférase de luciole (luc1) sont inoculées dans un hémi-rate qui est ensuite réséqué 10 minutes plus tard. L&#39;autre hémi-rate est laissé intact et est retourné à l&#39;abdomen. La croissance des tumeurs du foie peuvent être surveillés par imagerie par bioluminescence en utilisant l&#39;imagerie IVIS ensemble du système du corps. Imagerie quantitative de la croissance tumorale en utilisant IVIS fournit une quantification précise des cellules tumorales viables. La mort des cellules tumorales et la nécrose due à un traitement médicamenteux est indiqué au début par une réduction dans le signal de bioluminescence. Ce modèle de souris permet d&#39;étudier les mécanismes sous-jacents métastatique des tumeurs cellule de survie et de croissance et peut être utilisé pour l&#39;évaluation des traitements des métastases hépatiques.

Cet article décrit une procédure pour l&#39;induction de tumeurs du foie orthotopique chez des souris bioluminescentes, et l&#39;analyse ultérieure de la croissance tumorale limitées au foie en utilisant l&#39;imagerie en direct toute la luminescence du corps.

Modèle murin Bioluminescent tumeurs hépatiques

Cette vidéo décrit l'établissement de métastases hépatiques dans un modèle murin pouvant être analysé ultérieurement par imagerie bioluminescente. Les cellules tumorales sont...

Bonjour à tous. Je m'appelle Simon Regenron. Je suis l'un des chirurgiens inscrits au centre de recherche sur le cancer du rein ici en Irlande.Aujourd'hui, je vais vous montrer une technique chirurgicale permettant d'induire des métastases hépatiques. Dans un modèle murin, le foie est un site fréquent de dissémination métastatique et une cause majeure de mortalité liée au cancer. Seul un faible pourcentage de patients atteints d'une maladie hépatique avancée est éligible à une résection chirurgicale.Par conséquent, de nouveaux traitements sont nécessaires pour soigner cette affection. De nombreux modèles animaux de métastases hépatiques ne reproduisent pas une maladie comparable à la situation clinique. Le modèle que je vous présente aujourd'hui est un modèle cliniquement pertinent, relativement facile à maîtriser et offrant des taux de réussite très élevés.Ce modèle consiste à diviser la rate en deux hémirates. Une hémirate est utilisée pour l'inoculation de cellules tumorales. Ces cellules tumorales migrent à travers la circulation porte jusqu'au foie.La moitié restante de la rate est laissée intacte afin de préserver ses propriétés immunologiques. La lignée cellulaire utilisée e

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Luciférase modifiée xénogreffes de tumeurs humaines du cerveau peut être établie par voie intracrânienne chez des souris athymiques, avec un suivi ultérieur de la croissance tumorale et la réponse au traitement en utilisant l'imagerie par bioluminescence. En combinaison avec une analyse de survie, de surveillance bioluminescence est un outil de recherche indispensable pour les essais pré-cliniques de thérapies envisagées pour le traitement des tumeurs cérébrales.

Établir intracrânienne xénogreffes tumorales du cerveau avec analyse ultérieure de la croissance tumorale et la réponse à la thérapie à l&#39;aide d&#39;imagerie par bioluminescence

L'imagerie par bioluminescence des inducible factor-1α activité hypoxie est appliqué pour surveiller le développement intracrânienne hypoxie tumorale dans un modèle de cancer du sein métastatique cerveau de souris.

Dans l&#39;imagerie de bioluminescence in vivo de la tumeur Dynamics hypoxie des métastases cérébrales du cancer du sein dans un modèle murin

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Modèle murin de cancer du pancréas orthotopique bioluminescent : une technique non invasive pour surveiller la progression du cancer chez la souris

Source:Marina Arantes Radicchi1, Victor Carlos Mello1,Victória Paz Machado1, Márcia Cristina Oliveira da Rocha1, Jaqueline Vaz de Oliveira1, Luana Cristina Camargo1,2, Luís Alexandre Muehlmann1, Ricardo Bentes Azevedo1, Sônia Nair Bao1, João Paulo Figueiró Longo11Institut des sciences biologiques, Université de Brasília, 2Département des processus psychologiques fondamentaux, Institut de psychologie, Université de BrasíliaCette vidéo montre la procédure de suivi de la progression tumorale in...

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Source : Clark, A.J., et al. Imagerie par bioluminescence d’un modèle animal immunocompétent pour le glioblastome. J. Vis. Exp. (2016)Cette vidéo fait la démonstration de l’imagerie par bioluminescence pour suivre la progression du glioblastome dans un modèle murin immunocompétent, en utilisant des cellules tumorales exprimant la luciférase et la luciférine pour quantifier la croissance tumorale de manière non invasive.

Imagerie par bioluminescence d’un modèle murin immunocompétent pour le glioblastome

Une meilleure compréhension de la biologie du cancer du pancréas est critique nécessaire pour permettre le développement de meilleures options thérapeutiques pour traiter le cancer du pancréas. Pour répondre à ce besoin, nous démontrons un modèle orthotopique de cancer du pancréas qui permet une surveillance non invasive de la progression du cancer à...

Modèle Orthotopique bioluminescente la progression du cancer du pancréas

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Méthode peu invasive de génération d’un modèle murin orthotopique syngénique de cancer du poumon

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Modèle murin Bioluminescent tumeurs hépatiques

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