Synchronisation des nématodes : une méthode pour obtenir des populations de vers à des stades de développement identiques

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Biologie

0 vues • 3:43 min • April 30th, 2023

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-Commencez par placer les vers autofécondants dans leur dernier stade larvaire sur des plaques ensemencées avec une source de nourriture bactérienne. Laissez les larves se développer en adultes matures jusqu'à ce qu'il y ait une abondance d'œufs dans les vers et pondus sur les plaques. Lavez les plaques avec un tampon pour recueillir les œufs et les vers.

Ensuite, remplacez le tampon par une solution d’eau de Javel qui dissout les vers adultes. Protégés par la coquille de l’œuf, les embryons survivront à ce traitement, bien qu’ils se trouvent à des stades de développement différents. Remplacez ensuite l’eau de Javel par un tampon et laissez les embryons se développer. Lorsque les larves éclosent de leur coquille d’œuf en l’absence de nourriture, le développement s’arrête au premier stade larvaire.

Transférez les larves dans des assiettes avec de la nourriture pour reprendre le développement. Cela stimulera la progression synchrone à travers les stades larvaires restants.

Lorsque les vers atteignent le dernier stade larvaire, déplacez-les dans des assiettes avec de la nourriture et du FUdR, un inhibiteur de la synthèse de l’ADN qui empêche la production de progéniture. Le développement continu en présence de FUdR produit une population de vers adultes stériles. Dans cette expérience, nous synchroniserons une population de nématode C. elegans.

-Pour commencer, transférez les larves L4 du patrimoine génétique souhaité sur une pelouse fraîchement ensemencée d’Escherichia coli sur un milieu de croissance de nématodes ou des plaques NGM. Utilisez au moins deux plaques de 100 millimètres ou trois plaques de 60 millimètres pour chaque souche.

Incuber les vers à la température de croissance appropriée pendant trois à quatre jours ou jusqu’à ce que les plaques soient concentrées avec un grand nombre d’œufs et de vers gravides. Lavez les œufs et les vers des plaques à l’aide d’environ six millilitres de tampon M9 pour une plaque de 100 millimètres de nématodes. À l’aide de pipettes Pasteur en verre, transférez les œufs et les vers dans des tubes à centrifuger individuels de 15 millilitres pour chaque souche. Faites tourner ces tubes pendant trois minutes à 6 180 g.

Après la centrifugation, aspirez le tampon M9 en ne conservant que l’animal et les granulés d’œufs. Ajoutez trois à quatre millilitres de solution d’eau de Javel dans chaque tube et faites un vortex intermittent pendant six minutes.

Ajoutez ensuite un tampon M9 pour remplir chaque tube et essorez à 6 180 g pendant une minute. Aspirez le surnageant et répétez ce lavage avec M9 trois fois.

Après le lavage, placez la pastille d’œuf dans un tube frais de 15 millilitres contenant environ neuf millilitres de tampon M9. Synchronisez les vers fraîchement éclos en les nutant à 20 degrés Celsius pendant 16 à 48 heures.

Après avoir fait tourner ces tubes à 6 180 g pendant 1,5 minute, déposez les animaux synchronisés L1 sur une pelouse fraîchement ensemencée d’OP50 sur des plaques NGM individuelles. Maintenez les plaques à 20 degrés Celsius jusqu’à ce que les animaux atteignent le stade larvaire L4 après environ 42 heures. À ce moment, utilisez un pic à platine pour déplacer les larves L4 vers des plaques NGM ensemencées OP50 contenant 0,5 milligramme par millilitre de FUdR pour les empêcher de produire une descendance.

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Dernière mise à jour : 15 août 2026