Génération de sphéroïdes à partir de lignées cellulaires : une méthode de culture cellulaire tridimensionnelle (3D)

Cultivez la lignée cellulaire souhaitée en tant que monocouche 2D adhérente. Retirez le milieu de culture et lavez-le avec une solution saline tamponnée au phosphate ou du PBS. Ensuite, ajoutez de la trypsine et incubez pendant que les cellules se détachent de la surface du ballon et deviennent de forme ronde. Ajoutez un milieu frais pour neutraliser la trypsine et suspendre les cellules. Transférez le mélange dans un tube conique et utilisez une centrifugeuse pour granuler les cellules.

Remplacez le surnageant par un milieu frais et remettez en suspension la pastille de la cellule. Utilisez un hémocytomètre pour compter le nombre de cellules et calculer une concentration de travail. Ensuite, transférez la bonne quantité de mélange cellulaire dans une plaque à puits à très faible adhérence à fond rond et incuberez. Les cellules se déposent au fond et s’agrègent. Ils finiront par s’attacher les uns aux autres et former un assemblage compact de cellules 3D, le sphéroïde.

Dans l’exemple de protocole, nous verrons comment générer des sphéroïdes 3D à partir d’une lignée cellulaire de cancer du côlon, et comment l’imagerie en direct est appliquée pour suivre leur formation. Commencez par l