drosophile Conditionnement de parade nuptiale : une méthode pour tester l’apprentissage et la mémoire chez les mouches
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-Tout d’abord, isolez des mâles uniques de Drosophila melanogastor naïfs ou non accouplés. Ensuite, pour conditionner les mâles, ajoutez une femelle qui s’est déjà accouplée, et qui n’est donc pas réceptive à la parade nuptiale. Le mâle affiche des comportements de parade nuptiale typiques tels que s’orienter vers elle, la suivre partout, la taper avec une patte avant et étendre et faire vibrer son aile pour produire le chant nuptial. Il peut également tenter de lécher et de s’accoupler. Quels que soient les efforts, la femelle reste non réceptive et le mâle subit un rejet. Ainsi, il apprend à ne pas courtiser une femelle préalablement accouplée.
Pour tester la mémoire du mâle, laissez-le se reposer, puis exposez-le à une autre femelle accouplée. Le mâle dressé ne tentera pas de courtiser cette mouche car il conserve le souvenir du rejet passé. Dans l’exemple de protocole, nous verrons comment les mouches sont manipulées pendant les phases d’entraînement et de test d’un test de conditionnement nuptial pour l’évaluation de la mémoire à court et à long terme.
- Commencez par anesthésier tous les adultes des fichiers d’accouplement de quatre jours. Séparez les sexes et transférez les femelles accouplées dans chacun des 12 puits d’une rangée d’un bloc d’habitation. Ensuite, à l’aide d’un aspirateur et sans anesthésie, retirez les mâles naïfs de leurs puits domestiques et transférez-les dans les puits contenant les femelles préaccouplées. Répétez ce processus dans la deuxième rangée pour configurer 12 paires supplémentaires.
Pour tester l’apprentissage ou la mémoire à court terme, effectuez cette configuration à l’aube et laissez la période d’entraînement durer une heure. Pour tester la mémoire à long terme, mettez en place les paires quatre heures avant l’aube subjective et laissez l’entraînement se poursuivre pendant huit heures.
- Pour que l’apprentissage et la mémoire soient établis, il est important que les mâles ne parviennent pas à copuler, alors vérifiez périodiquement les paires pendant la période d’entraînement, pour vous assurer que les mâles sont rejetés.
Lorsque la période d’entraînement est terminée, retirez doucement les mâles des puits à l’aide d’un aspirateur et non d’une anesthésie au dioxyde de carbone. Chargez les mâles dans un nouveau bloc d’habitation. Pour l’expérience d’apprentissage, testez immédiatement les mâles après l’entraînement, sans période de repos. Pour l’expérience de la mémoire à court terme, laissez les mâles se reposer une heure avant de commencer l’étape de test. Pour l’expérience de la mémoire à long terme, reposez les mâles jusqu’à l’aube subjective suivante.
Pour se préparer à l’étape de test de l’expérience, anesthésez les femelles pré-accouplées et transférez-les dans une nouvelle nourriture normale. Attendez au moins une heure pour que les mouches se remettent de l’anesthésie. Ensuite, préparez la configuration de test. Assurez-vous d’avoir les magnétoscopes prêts à enregistrer l’activité dans les arènes de parade nuptiale.
Pour commencer le test, utilisez une aspiration douce pour transférer un mâle test du bloc d’habitation à l’arène de parade nuptiale avec les séparateurs fermés. Déplacez les trous d’entrée entre les arènes jusqu’à ce que les 18 arènes soient remplies d’hommes célibataires. Ensuite, en utilisant la même technique, transférez les femelles préaccouplées individuelles dans chacune des 18 arènes, mais de l’autre côté des séparateurs. Maintenant, retournez soigneusement l’arène de parade nuptiale et placez-la sous la caméra vidéo avec les ouvertures du puits vers la surface du banc blanc. Ensuite, retirez les séparateurs et lancez l’enregistrement vidéo. Enregistrez au moins 10 minutes d’activité. Une fois l’expérience terminée, retirez les mouches des arènes à l’aide d’un aspirateur et aérez les chambres de parade nuptiale pendant au moins 10 minutes avant de les réutiliser.
