JoVE Encyclopedia of Experiments
Biologie
0 vues • 2:33 min • April 30th, 2023
-Tout d’abord, obtenez un nombre défini de drosophiles adultes. La chambre d’essai pour l’essai grimpant est composée de deux flacons collés ensemble. L’un de ces flacons doit être marqué d’une ligne.
Sans anesthésie au dioxyde de carbone, qui peut altérer le comportement en escalade, transférez un nombre défini de mouches dans la chambre d’essai. Laissez les mouches se rétablir pendant une durée prédéterminée. Avec le côté marqué de la chambre vers le bas, tapotez fermement la chambre sur un tapis de souris placé sur une surface solide. Cela forcera les mouches au fond de la chambre. Le test d’escalade tire parti de la tendance naturelle de la drosophile à grimper vers le haut contre la gravité, un comportement appelé géotaxie négative.
Pendant l’essai, les mouches ne doivent pas être exposées à la lumière directe du soleil, car elles pourraient présenter un comportement de phototaxie ou un mouvement en réponse à un stimulus lumineux. Notez le nombre de mouches qui atteignent ou dépassent la ligne. Obtenez ensuite le pourcentage de réussite en divisant ce nombre par le nombre total de mouches testées. Laissez les mouches récupérer avant de répéter l’essai. Dans l’exemple, nous observerons un test d’escalade de mouches utilisé pour évaluer la fonction motrice de la drosophile après mutagenèse chimique.
-Pour commencer, collecter des mouches homozygotes à partir de lignées appartenant à la collection mutagénisée ENU de mutants de la drosophile cartographiés sur le deuxième chromosome. Retournez les mouches âgées de 10 à 12 jours dans une chambre d’essai sans anesthésie, une ligne à la fois, et laissez-les récupérer pendant cinq minutes.
Avec la ligne de cinq centimètres marquée côté vers le bas, tapotez de force la chambre trois fois sur un tapis de souris placé sur une surface solide afin que toutes les mouches commencent le test par le bas. Observez la locomotion des mouches sur une période de 10 secondes. Notez le nombre de mouches qui atteignent ou dépassent la ligne des cinq centimètres dans ce laps de temps ainsi que le nombre total de mouches testées. Attendez une minute avant de commencer un deuxième essai. Répétez au moins trois répétitions d’essai par ligne.