Drosophila melanogaster Le curage ganglionnaire ovarien : une technique de préparation tissulaire ex vivo

- Afin d’isoler les ovaires des mouches drosophiles vivantes, commencez par déplacer une femelle anesthésiée dans l’un des trois puits de dissection remplis d’un milieu de dissection d’insectes préchauffé. Le milieu aidera à maintenir l’intégrité et la viabilité des tissus.

Sous un microscope de dissection, séparez l’abdomen du thorax. Ensuite, déplacez l’abdomen dans un nouveau puits. Pour isoler les ovaires, tenez l’abdomen à l’extrémité postérieure et grattez soigneusement les organes reproducteurs. Enfin, transférez les ovaires dans un puits frais. Après cette étape, vous pouvez soit utiliser l’ovaire entier, soit le disséquer davantage en ses structures constitutives.

Chaque ovaire de la drosophile est composé de plusieurs ovaires, constitués d’une chaîne de chambres d’œufs avec des niveaux de maturité croissants. Pour libérer les ovaires, épinglez l’ovaire à l’extrémité postérieure opaque et taquinez soigneusement la gaine protectrice autour de l’ovaire jusqu’à ce que les ovarioles soient correctement séparés.

Dans l’exemple de protocole, nous montrerons la dissection des ovaires de la drosophile pour leur utilisation en microscopie tissulaire vivante et fixe.

- Après avoir trié cinq mouches femelles anesthésiées selon le protocole de texte, sous le microscope de dissection, utilisez deux paires de pinces pour sectionner le thorax de l’abdomen. Ensuite, transférez soigneusement les abdomens dans le deuxième puits du plat. À l’aide d’une paire de pinces pour maintenir l’abdomen à l’extrémité postérieure, utilisez l’autre paire de pinces pour pousser lentement les ovaires vers l’extérieur.

Ensuite, utilisez la pince pour tenir un ovaire individuel par l’extrémité postérieure opaque et déplacez-le soigneusement vers le troisième puits du plat pour le taquiner ou le fixer. Taquinez soigneusement la gaine protectrice autour des ovaires à l’aide d’une paire de pinces pour tenir l’extrémité postérieure et en balayant légèrement une aiguille taquine de l’extrémité postérieure à l’extrémité antérieure.