Dissection du tubule de Malpighian d’une mouche adulte : isolement d’un organe osmorégulateur et excréteur

- Commencez par une mouche adulte anesthésiée dans une boîte de dissection. Tenez la mouche par le thorax à l’aide d’une pince et ouvrez l’extrémité postérieure de l’abdomen à l’aide d’une deuxième paire de pinces. Étant donné que les mouches adultes ont deux paires de tubules de Malpighi ou MT qui convergent vers l’intestin par des uretères communs, tirez l’intestin postérieur hors de la mouche pour libérer les MT. La paire postérieure de MT sera libérée en premier lorsqu’elle s’encerclera derrière l’intestin. Continuez à tirer sur l’intestin pour libérer les MT antérieurs, puis pincez-les au niveau de l’uretère pour les séparer de la mouche.

Pour monter les tubules, glissez une tige de verre sous l’uretère et transférez les MT sur une lame recouverte de poly-L-lysine. Fixez les organes disséqués en appuyant sur l’uretère, puis balayez soigneusement la tige sur les MT. La poly-L-lysine sur la lame favorisera la fixation en augmentant le nombre de sites chargés positivement disponibles pour que les cellules chargées négativement des tubules se lient. Dans le protocole suivant, nous disséquerons les MT d’une mouche femelle adulte et les monterons pour une imagerie en direct ex vivo