Island Assay : une méthode à haut débit pour évaluer le comportement locomoteur de la drosophile

- Le test de l’île consiste en une plate-forme blanche surélevée dans un bac d’eau savonneuse, recouverte d’une boîte transparente avec un côté ouvert. Une caméra sur le dessus du boîtier enregistre des images aériennes de la plate-forme, et des lumières sont placées pour assurer un éclairage uniforme de la zone.

Pour charger les mouches sur l’arène, tapotez une fiole contre une surface plane pour amener toutes les mouches au fond. En succession rapide, retirez le bouchon du flacon, retournez-le et tapotez l'extrémité ouverte du flacon sur la plate-forme pour assommer toutes les mouches en même temps. L’atterrissage sur la plate-forme déclenche une réponse d’évacuation. Les mouches à mobilité typique peuvent dégager la plate-forme en quelques secondes, contrairement à celles présentant des défauts locomoteurs.

Les sujets sont confinés dans la boîte, et ceux qui atterrissent sur l'eau savonneuse sont rapidement immergés car le savon diminue la tension superficielle de l'eau. Pour évaluer le comportement locomoteur dans différentes conditions, comptez les mouches restantes sur la plate-forme après une période de temps définie.

Dans cet exemple de protocole, nous verrons une configuration du test d’îlot compatible avec l’analyse d’images semi-automatisée.

- Tout d’abord, préparez un minimum de trois flacons par condition expérimentale sous forme de répétitions biologiques. Chaque flacon doit contenir environ 15 mouches du même sexe et du même âge. Il est important de noter que les mouches doivent avoir des ailes intactes.

Créez les dossiers pour stocker les expériences. Générez-les dans une structure de répertoires définie par les conditions et les réplications. Si, par exemple, l’expérience comporte deux génotypes de cinq répétitions chacun, créez un dossier principal avec la date de l’expérience et, à l’intérieur de ce dossier, créez un sous-dossier pour chaque génotype. Ensuite, dans les dossiers de génotype, créez des sous-dossiers pour chaque répétition.

Ensuite, installez l’appareil de test. Ajoutez de l’eau froide avec une petite quantité de savon dans le plateau de la baignoire et positionnez la plate-forme au milieu de la baignoire, si elle n’est pas déjà fixée dans la baignoire. Couvrez le plateau et la plate-forme avec une boîte transparente.

Pour éclairer la plate-forme, placez une lampe froide, telle que des LED ordinaires de 12 volts, au-dessus d’elle. Placez également une webcam connectée à un ordinateur directement au-dessus de la plate-forme.

Sur l’ordinateur, ouvrez le logiciel d’enregistrement d’images. Dans le système de menu, sélectionnez la webcam appropriée comme périphérique de capture. Placez une mouche morte sur l’île pour ajuster les paramètres vidéo. Ajustez la luminosité, le contraste et la couleur dans le logiciel pour que la mouche morte apparaisse noire sur un fond blanc.

Ensuite, ajustez la configuration des films en accéléré pour enregistrer les films sous forme de fichiers AVI. Ensuite, naviguez jusqu’au répertoire où les données doivent être enregistrées et définissez le nom du film. Enregistrez ces modifications.

Pour la compression des données d’image, choisissez le code Intel IYAV. Réglez la vitesse d’enregistrement sur une image toutes les 0,1 seconde et ajustez la vitesse de lecture correspondante sur 10 images par seconde.

Enfin, allez dans le paramètre Avancé et sélectionnez Créer une image BNP pour chaque image capturée. Ensuite, naviguez jusqu’au même répertoire que celui que vous avez choisi pour héberger les fichiers AVI et appuyez sur OK.

Avant de commencer, assurez-vous que l’île est vide et propre. Ensuite, démarrez l’enregistrement dans l’interface d’image en accéléré du logiciel d’enregistrement d’images.

Prenez une fiole contenant des mouches et tapotez-la deux ou trois fois pour faire tomber toutes les mouches au fond. Ensuite, retirez rapidement le bouchon de la fiole et tapotez vigoureusement les mouches sur la plate-forme. Ils devraient tous arriver sur la plate-forme à peu près en même temps.

Donnez aux mouches jusqu’à 30 secondes pour quitter la plate-forme. Ensuite, arrêtez l’enregistrement. Si nécessaire, retirez manuellement toutes les mouches restantes de la plate-forme.

Avant de passer à l’expérience suivante, assurez-vous de redéfinir le répertoire dans lequel le prochain ensemble de données doit être stocké.