JoVE Encyclopedia of Experiments
Biologie
0 vues • 3:28 min • April 30th, 2023
- Commencez par cohabiter un nombre déterminé de mouches des fruits de Drosophila melanogaster mâles et femelles dans un flacon contenant de la semoule de maïs. Cela permet une densité constante de progéniture.
Laissez les mouches femelles pondre des œufs. Retirez ensuite les mouches adultes. Les œufs deviendront des larves, des pupes et enfin des mouches adultes en l’espace de 10 jours. Les nouvelles mouches qui émergent plus tôt que leur cohorte doivent être éliminées avant le 9e jour. Divisez les mouches maintenant synchronisées en groupes pour le contrôle et les conditions expérimentales. Le cohabitation des mouches mâles et femelles permet l’accouplement, supprimant ainsi une variable qui affecte la durée de vie.
Après plusieurs jours, séparez les mouches par sexe en groupes. Placez un nombre égal de mouches dans les conditions expérimentales correspondantes. Tous les trois jours, transférez les mouches vivantes dans une nouvelle fiole et notez le nombre de mouches mortes. Répétez ce processus jusqu’à ce que toutes les mouches soient mortes.
Après au moins trois expériences répétées, tracez le pourcentage moyen de mouches survivantes par jour pour générer des courbes de survie moyennes pour chaque condition. Dans cet exemple, nous allons voir comment générer des courbes de survie pour des cohortes traitées avec des perturbateurs endocriniens.
- Dans le protocole de durée de vie, installez d’abord 20 flacons avec huit femelles et quatre mâles, chacun rempli de 10 millilitres de semoule de maïs, et logez-les à 25 degrés Celsius. Après quatre jours, jetez les mouches et remettez les flacons dans l’incubateur. En fin d’après-midi du jour 9, retirez toutes les mouches nouvellement émergées des flacons et remettez les flacons dans l’incubateur.
Après 16 à 24 heures, divisez à 250 mouches adultes d’un jour des deux sexes en quatre groupes sous légère anesthésie au dioxyde de carbone et transférez-les dans des bouteilles de 250 millilitres contenant de la nourriture moyenne pour adultes, trois complétées par différentes concentrations d’EDC et une avec le solvant EE2 seul. Maintenez les mouches à 25 degrés Celsius pendant deux à trois jours pour leur permettre de s’accoupler. Ensuite, triez chaque cohorte de mouches par sexe en deux groupes. Dans chaque condition de traitement pour les deux sexes, subdivisez au hasard chaque groupe en cinq flacons parallèles à une densité de 20 individus par flacon. Préparez une feuille de calcul de durée de vie dans laquelle le nombre de mouches mortes est soustrait du nombre de mouches survivantes du transfert précédent afin que le nombre de survivants à chaque transfert soit automatiquement obtenu.
Après trois jours, transférez les mouches sans anesthésie dans de nouveaux flacons contenant la nourriture correspondante en même temps et vérifiez qu’il n’y a pas de mort. Notez l’âge des mouches et le nombre de mouches mortes. Répétez le transfert tous les trois jours jusqu’à ce que toutes les mouches meurent.