Montage de cerveaux de drosophile adulte : une méthode de préparation de lames pour l’imagerie confocale

- Sur une lame de microscope chargée positivement, collez deux lamelles de protection avec une distance suffisante entre elles pour créer un espace pour le montage des cerveaux de drosophile. Sous le stéréomicroscope, pipetez les cerveaux dans le support de montage dans cet espace. La charge négative du tissu aidera le cerveau à adhérer à la charge positive à la surface de la lame.

Retirez l’excès de support de montage pour permettre un positionnement précis des cerveaux sur la lame selon un quadrillage avec les lobes antennaires vers le haut, puis pontez les deux lamelles en collant une troisième lamelle pour couvrir les cerveaux.

Pour remplir la cavité, placez le support de montage, une goutte à la fois, dans le bord de la cavité et laissez-le se propager par capillarité afin qu’il ne dérange pas le cerveau.

Scellez la cavité avec du vernis à ongles et conservez-la à moins 20 degrés Celsius dans l’obscurité pour préserver la fluorescence des tissus tachés.

Dans l’exemple de protocole, nous allons monter des cerveaux de drosophile pour l’imagerie confocale de neurones immunomarqués.

- Pour monter les cerveaux, construisez un toboggan de pont. Positionnez deux couvercles de base qui glissent à environ un centimètre l’un de l’autre sur une glissière chargée positivement. Assurez-vous que le côté chargé positivement est face vers le haut. Collez ensuite les lamelles sur la lame avec du vernis à ongles et laissez le vernis sécher complètement avant de continuer.

Ensuite, placez la lame sous un stéréomicroscope et pipetez les cerveaux en milieu dans l’espace entre les lamelles. Assurez-vous d’ajuster l’éclairage pour améliorer la visualisation du cerveau.

Ensuite, aspirez le support de montage supplémentaire de la diapositive, en faisant attention d’éviter les cerveaux. Ensuite, évacuez l’excédent de support de montage. Cela permettra de positionner plus précisément les cerveaux. Maintenant, à l’aide de pinces, orientez les cerveaux dans un motif de grille avec leurs lobes antennaires vers le haut.

Ensuite, placez un feuillet sur la cervelle et utilisez du vernis à ongles pour sceller les bords du couvercle supérieur qui sont fixés aux feuillets de couverture de base.

Maintenant, chargez la cavité centrale avec un nouveau support de montage dans le sens de la goutte, ce qui permet au support d’être aspiré sous la glissière de recouvrement par capillarité. Lorsque la cavité est remplie, scellez-la complètement à l’aide de vernis à ongles transparent.