Encyclopedia of Experiments: Biology
Un abonnement à JoVE est nécessaire pour afficher ce contenu. Connectez-vous ou commencez votre essai gratuit.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- أولا، يرقات Drosophila المناعية مع علامات تسلط الضوء على جوانب مختلفة من NMJs أو تقاطعات العصبية والعضلية.
ينتهي المحور في العديد من الفروع التي تشكل انتفاخات تسمى boutons. يتم تحرير الناقلات العصبية من boutons وتسبب تقلص العضلات.
بعد ذلك، احصل على صور NMJ باستخدام المجهر وقيم كميا مورفولوجياها باستخدام برنامج تحليل الصور شبه الآلي. تطبيق سلسلة محددة مسبقا من أوامر البرامج على الصور. تحتوي ملفات الإخراج على صور NMJ محللة ونتائج مورفولوجيا.
في المثال التالي ، سنقوم بتحليل مورفولوجيا Drosophila NMJs الملطخة DLG1 ، وهي علامة ما بعد الاشتباك العصبي ، وBRP ، وهي علامة منطقة نشطة.
- لهذا البروتوكول، وتوليد أكوام صورة من NMJs وحفظها كملفات TIFF الفردية حيث القناة 1 يظهر DLG1 تلطيخ أو علامة مماثلة والقناة 2 يظهر تلطيخ BRP. للبدء، وخلق التوقعات Z وhyperstacks من ملفات الصور NMJ. فتح خيارات البرنامج المساعد وحدد Drosophila NMJ morphometrics.
الآن، حدد سلسلة الملفات الفريدة التي خصصها المجهر لسلسلة الصور عند تخزينها ك TIFF. وسيكون هذا في نهاية اسم الصورة. نسخ ولصق السلسلة المعطاة لأدنى مستوى ورقم القناة في إطار إعداد سلسلة الملفات الفريدة.
لكل ملف صورة، يتم إجراء ملفين جديدين مع كومة الأسماء الافتراضية وكومة مسطحة، تليها اسم الصورة الأصلية.
عند فتح الإسقاط الأول، حدد أداة التحديدات اليدوية، ثم استخدم الماوس لتحديد منطقة تحتوي على محطة اهتمام NMJ كاملة. بمجرد تحديدها، انقر فوق موافق في نافذة المحطة الطرفية المحددة. استمر في القيام بذلك حتى يتم تعريف محطات NMJ في جميع الإسقاطات.
لتحديد ملامح NMJ، انتقل أولا إلى واجهة Drosophila NMJ morphometrics وقم بتعيين المقياس. على سبيل المثال ، إذا كان بكسل واحد من الصورة يتوافق مع 0.72 ميكرون ، وتعيين بكسل مقياس إلى 1 ومسافة المقياس إلى 0.072. ثم حدد تحليل الماكرو الفرعي ، وإذا كانت هناك صورتان للقناة ، فقم أيضا بتبديل Wait. Press OK وعند المطالبة ، حدد دليل ملف الصورة.
بعد التحليل، يتم تخزين ملفات صور جديدة لكل مشبك تم تحليله في المجلد الأبوي، والقياسات الكمية موجودة في النتائج.txt الملف. تفقد جميع الصور واستبعاد الصور التي تحتوي على أخطاء تجزئة.
على سبيل المثال، قد لا يتم تضمين أجزاء من المحطة الطرفية المتشابكة في المخطط التفصيلي الأصفر.
