Lésion neuronale induite par un laser à deux photons : une méthode pour observer la dégénérescence et la régénération des axones chez les larves de drosophile

- Commencez par monter une larve propre et anesthésiée sous une lamelle en verre, la tête vers le haut. Ensuite, exposez la zone d’intérêt en poussant doucement la lamelle pour faire rouler la larve et ajuster sa position. Utilisez l’imagerie confocale pour localiser les cellules neurales de la larve. Identifiez un axone spécifique sur l’une des cellules neurales cibles comme site de la lésion.

Ensuite, exposez l’axone cible à un laser à deux photons à une puissance supérieure à celle utilisée pour l’imagerie afin d’induire des dommages. Un laser à deux photons est utilisé en raison de sa capacité à pénétrer et à localiser avec précision les dommages dans les tissus vivants avec des dommages minimes aux tissus environnants.

Arrêtez immédiatement l’exposition au laser lorsqu’il y a des dommages au neurone cible, entraînant une axotomie ou une section de l’axone. Enfin, imagez le neurone blessé pour voir sa dégénérescence et sa régénération ultérieure aux points temporels souhaités.

Dans l’exemple de protocole, nous allons monter une larve pour la microscopie, induire des dommages aux neurones sensoriels des larves et suivre la régénération neuronale.

- Commencez par anesthésier les