Le dosage CApillary FEeder (CAFE) : une méthode pour suivre la consommation et les préférences alimentaires chez la drosophile

- Pour vous préparer au dosage CAFE, insérez des capillaires en verre gradués ou marqués remplis d’aliments liquides colorés, l’extrémité inférieure en premier, à travers les pointes de pipette situées sur le dessus d’un flacon expérimental préassemblé. Assurez-vous que les capillaires sont bien placés à la même hauteur et qu’ils ne sont pas en contact avec l’appareil.

Marquez le niveau de départ du ménisque dans chaque capillaire. Ensuite, rangez les flacons dans un environnement contrôlé par la température, l’humidité et la lumière pendant la durée de l’expérience, tout en remplaçant les capillaires au besoin. Pendant le test CAFE, les mouches mobiles sont libres et ont un accès libre à l’extrémité inférieure ouverte de la micropipette. Les mouches se nourrissent volontairement en étendant leur trompe et en absorbant le liquide, réduisant ainsi le milieu à l’intérieur du capillaire.

Pour suivre la consommation et la préférence alimentaires pendant une période donnée, enregistrez la descente du ménisque entre la marque de départ et le niveau à la fin de cette période à partir des capillaires admissibles. Dans l’exemple de protocole, nous verrons le test CAFE avec l’assemblage modifié pour obtenir une évaporation réduite des capillaires remplis de liquide.

- Retirez délicatement l’embout de la pipette qui ferme l’une des ouvertures extérieures et insérez un capillaire en verre rempli, l’extrémité inférieure en premier. Fixez le capillaire en replaçant l’embout de la pipette à côté du capillaire. Répétez cette étape pour toutes les solutions alimentaires testées.

Ensuite, placez les extrémités capillaires à l’intérieur de tous les flacons au même niveau, à 3 à 4 centimètres du couvercle. Laissez une certaine distance entre le papier filtre pour éviter que le capillaire ne fuit. Utilisez un marqueur pour étiqueter l’extrémité supérieure du liquide coloré. Étiquetez-les individuellement à l’aide d’un code à bandes pour vous assurer que les différents capillaires peuvent être identifiés.

Placez les dosages CAFE préparés dans une boîte en plastique avec une incrustation grillagée. Utilisez une bonde éponge pour appliquer 100 microlitres d’eau douce toutes les 24 heures pour maintenir l’humidité constante à l’intérieur du test. Utilisez quatre flacons séparés remplis de 30 millilitres de H2O double distillé comme dispositifs d’humidité, et placez-les à côté des dosages CAFE dans la boîte en plastique.

Couvrez la boîte en plastique pour créer un environnement à humidité contrôlée pendant l’expérience. Transférez la boîte dans une position sûre dans une chambre climatique à température, lumière et humidité contrôlées pour la période expérimentale. Avant chaque intervalle de 24 heures, notez les mouches mortes et utilisez le nombre de mouches vivantes pour calculer la consommation par mouche pour la période suivante.

À la fin du dosage et avant de remplacer le capillaire, maintenez le dosage CAFE en position verticale. Ne retirez pas le couvercle et marquez le ménisque inférieur du capillaire. Ignorez les données si l’extrémité du repère n’est pas inférieure au repère initial. Remplacez les capillaires usagés par des capillaires fraîchement remplis pour des expériences à long terme toutes les 24 heures.

Mesurer le déclin du ménisque. Jetez ensuite les anciens capillaires. Ensuite, retirez soigneusement les capillaires du test et stockez-les pour la collecte de données. Vérifiez si le liquide à l’intérieur du capillaire a atteint l’extrémité inférieure. Si le liquide à l’intérieur du capillaire n’a pas atteint l’extrémité inférieure, jetez les données.

Après l’expérience, démontez l’installation et lavez les flacons, les couvercles et les bouchons d’éponge dans un bain de savon. Ensuite, séchez-les pendant la nuit à température ambiante pour une utilisation ultérieure. Répétez les expériences avec les mêmes génotypes pendant au moins trois jours différents. À l’aide d’un pied à coulisse, mesurez la distance entre le début et la fin du repère sur le capillaire. Enfin, jetez les capillaires après la mesure.