Larval лимфы Гланд вскрытие: Изоляция Drosophila гемоцитов производства органа

- Drosophila меланогастер личиночной лимфатической железы отвечает за производство гемоцитов, или клеток крови, которые циркулируют в личиночной гемолимфы. Для выявления лимфатической железы, сначала найти спинной сосуд, или сердце, которое насосы гемолимф по всему телу. Следуйте спинной сосуд к голове, пока вы не найдете мозг.

Чтобы найти первичную долей, определите самую большую долей железы. Эта доля содержит три зоны, определяемые различными стадиями развития гемоцитов. Медуллярная зона ближе всего к спинному сосуду содержит незрелые гемоциты, в то время как корковая зона содержит зрелые гемоциты.

Чтобы вскрыть лимфатическую железу, вам понадобится рассекающий микроскоп, два типса для манипулирования личинками и буферный солевой раствор.

В этом примере мы будем вскрывать лимфатические железы для использования в иммуногистохимии.

- Для начала вскрытия лимфатических желез, добавить 1 миллилитр 1x PBS до 1 хорошо 24-хорошо пластины для каждого экспериментального параметра, которые будут вскрыты. Затем, используя одноразовые передачи пипетки, добавить 1 капли 0,1% PBST к каждому колодец. Поместите пластину плашмя на лед. Место чистой вскрытой площадке на освещенной базе стереомикроскопа.

Передача личинки на падение PBST для вскрытия. Держите лаву с одной парой типсов, спинной стороной вверх, примерно 1/4 длины от заднего конца. Со второй парой типсов, возьмите кутикулу непосредственно перед первой парой и аккуратно потяните кутикулу личинки к передней, пока крючки рта не будут выставлены.

Отпустите кутикулу и использовать оба типса, чтобы разделить личинку. Удалить задний конец от падения PBST и отбрасывать. Pin вниз кутикулу для стабильности, а затем использовать вторую пару типсов, чтобы захватить открытые крючки рот и осторожно вытащить их. Это отделит кутикулу от внутренних структур.

Держась за крючки для рта, тщательно удаляйте нежелательные структуры, такие как слюнные железы, жировое тело и кишечник. Аккуратно подберите вскрытый тканевой комплекс за ротовые крючки и перенесите его в колодец пластины на льду. Повторите вскрытие с таким количеством личинок, сколько пожелает, но не превышать 30-минутного времени вскрытия, прежде чем перейти к этапу фиксации.

Чтобы начать монтаж тканей, поместите каплю монтажного буфера на стеклянную горку. Использование крючков для рта в качестве ручки, перенесите лимфатическую железу в буферную каплю.

Аккуратно сдвиньте один щипец щипцов под спинной сосуд, аккуратно потянув к периферии монтажного буфера, чтобы вытянуть и сгладить лимфатическую железу. При распиловке движения, вырежьте спинной сосуд между лимфатической железой и мозгом.

Возьмите чистый крышку скольжения и тщательно опустите его на монтаж буфера. Слайды теперь готовы для визуализации или могут храниться при 4 градусах по Цельсию до необходимости.