0 vues • 3:26 min • April 30th, 2023
- Laissez la drosophile pondre des œufs pendant la nuit dans un plat contenant de la gélose complétée par du jus de raisin pour visualiser les œufs et enrobée de levure pour encourager les mouches à s’accoupler et à pondre des œufs. Pour retirer les œufs, ajoutez de l’eau distillée dans le plat et essuyez doucement la surface avec un pinceau. Versez ensuite le mélange à travers un filet en nylon placé dans une douille en plastique pour recueillir les œufs. Faites tremper les œufs dans deux tours d’eau de Javel à 7 % pour enlever le chorion, ou couche externe protectrice, de l’embryon. Ce processus s’appelle la déchorionnation.
Les œufs sont maintenant collés sur le côté de la bague. Lavez-les trois fois à l’eau pour enlever l’eau de Javel. Enfin, utilisez un pinceau pour transférer les œufs de la douille dans des flacons afin de poursuivre le développement ou pour une utilisation immédiate dans une expérience. Dans l’exemple de protocole, nous collecterons et déchoionnerons des œufs de drosophile dans des conditions stériles pour élever des mouches avec un microbiote défini.
- Placez un filet de nylon dans une douille en plastique pour préparer le tamis à la collecte des œufs. Si les mêmes mouches doivent être utilisées le lendemain, transférez-les immédiatement dans une nouvelle cage contenant des plaques de gélose au jus de raisin fraîchement levées. L’assiette de jus de raisin dans la cage précédente contient les œufs de mouches à fruits. Enlevez les mouches mortes avec un pinceau propre et veillez à ne pas briser la gélose. Rincez la plaque de gélose avec de l’eau distillée et brossez doucement les œufs de la surface de l’agar, puis versez la bouillie sur le grillage pour recueillir les œufs.
Stérilisez l’enceinte de biosécurité avec de l’éthanol à 70 %, puis allumez la lumière UV. Vaporisez toutes les fournitures non biologiques avec de l’éthanol à 70 % et placez-les immédiatement dans l’enceinte de biosécurité, puis stérilisez-les à la lumière UV.
- Il est essentiel de s’assurer qu’une bonne technique d’asepsie est pratiquée lors du travail à l’intérieur de l’enceinte de biosécurité ou lors de l’ajout ou du retrait de nouveaux matériaux dans l’enceinte de sécurité biologique.
- Transférez la douille avec les œufs dans un gobelet d’échantillon de 120 millilitres et versez lentement 90 millilitres de solution d’hypochlorite de sodium à 0,6 %, ou d’eau de Javel à 7 %, dans la bague, juste en dessous du rebord. À l’aide d’une pince, déplacez périodiquement la douille de haut en bas dans la solution pour remettre les œufs en suspension. Transférez la douille directement dans un deuxième gobelet d’échantillon pré-rempli de 90 millilitres d’eau de Javel.
À la fin du deuxième traitement à l’eau de Javel, les œufs doivent commencer à adhérer aux côtés de la bague. Jetez l’eau de Javel et rincez complètement la douille à l’eau stérile. Encore une fois, utilisez une pince pour remettre l’œuf en suspension plusieurs fois à chaque lavage. À la fin du troisième lavage, la plupart des œufs devraient être attachés sur le côté de la bague.
À l’aide d’un pinceau stérile, transférez les œufs du côté de la douille dans le régime stérile. Laissez les capuchons desserrés pour permettre à l’oxygène de pénétrer dans le tube. Les ovules transférés seront visibles à la surface de l’alimentation.