Traitement de pattes d’insectes pour la microscopie à fluorescence : une méthode pour préserver les structures neuromusculaires pour l’imagerie

- Pour commencer, immergez les insectes anesthésiés dans une solution d’éthanol à 70 % pour réduire l’hydrophobicité de la cuticule. Ensuite, lavez et perméabilisez le tissu avec une solution saline tamponnée au phosphate contenant un détergent pendant au moins 30 minutes pour permettre la pénétration des tissus pendant la fixation.

Ensuite, retirez la tête et l’abdomen du thorax. Utilisez une pince pour appliquer une légère pression sur la jonction coxa-thorax et détachez la jambe. Placez soigneusement les cuisses dans une solution glacée de paraformaldéhyde à 4 % pendant la nuit pour lui permettre de pénétrer dans les tissus. Le paraformaldéhyde fixe les tissus en réticulant les protéines.

Ensuite, retirez la solution de fixation et lavez le tissu plusieurs fois avec un détergent contenant une solution saline tamponnée au phosphate. Avant le montage, placez les pattes dans un tampon de montage pur ou légèrement dilué pendant au moins une journée pour laisser suffisamment de temps au tampon pour pénétrer dans les tissus.

Enfin, montez les pieds dans une goutte de support de montage. Utilisez une entretoise entre la lame du microscope et la lamelle pour éviter d’endommager l’échant