0 vues • 4:39 min • April 30th, 2023
- Commencez par pulser la drosophile anesthésiée avec un tampon dans un mélangeur pour briser les mouches en petits morceaux. Filtrez le mélange à travers un filet pour éliminer les grandes parties du corps. Ensuite, laissez les œufs couler pendant que les plus gros fragments restent à la surface et peuvent être retirés.
Répétez ce processus en utilisant un maillage plus petit pour éliminer les débris supplémentaires. Recueillez les ovules dans un flacon, et si les ovules doivent être traités avec un médicament, faites-le à ce stade. Ensuite, retirez le liquide et remplacez-le par un fixateur. Ajoutez de l’heptane pour aider le fixateur à pénétrer la membrane entourant l’œuf.
Ensuite, lavez le fixateur avec du PBS. Pour colorer les ovocytes, retirez les membranes externes protectrices pour permettre la pénétration des anticorps. Pipetez les ovocytes sur la partie givrée d’une lame de verre. Placez une lamelle sur les œufs et roulez-la doucement dans un mouvement de va-et-vient pour séparer mécaniquement le chorion et la membrane vitelline de l’œuf. Les ovocytes sont maintenant prêts à être colorés.
Dans l’exemple de protocole, nous préparerons des ovocytes en méiose I pour colorer
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