0 vues • 2:45 min • April 30th, 2023
- Utilisez une arène couverte - par exemple, une boîte de Pétri remplie de silicone transparent - pour vous assurer que les mouches peuvent marcher librement, mais qu’elles ne peuvent pas voler à l’intérieur de l’arène lorsqu’elle est couverte. Placez l’antenne sur une surface éclairée en blanc et placez une caméra directement au-dessus.
Avec le couvercle ouvert, transférez les mouches anesthésiées dans le plat, couvrez-le et laissez les sujets récupérer. Les mouches se déplaceront librement dans l’arène pendant le procès. Pour évaluer la locomotion, suivez la position de chaque mouche au fil du temps et calculez les paramètres qui caractérisent la locomotion, tels que la distance parcourue par chaque mouche. Dans cet exemple de protocole, nous verrons une démonstration de la configuration et de l’analyse du test à l’aide d’un logiciel de suivi vidéo.
- Pour suivre les mouvements des mouches dans une boîte de Pétri, remplissez d’abord une boîte de 6 centimètres avec de l’élastomère de silicone transparent pour fabriquer l’arène de suivi. Laissez un espace de 3 millimètres entre le silicone et le couvercle, afin que les mouches puissent se promener librement dans l’espace, mais pas s’envoler. Sous l’arène de pistage, ayez un fond blanc.
Ensuite, anesthésez quatre mouches du même groupe de traitement et placez-les dans l’arène. Laissez les mouches s’acclimater pendant une heure à l’arène, qui doit être entièrement éclairée et à environ 22 degrés Celsius, pas plus chaude que la température ambiante. Après une heure, utilisez une caméra à dispositif à couplage de charge positionnée au-dessus de l’arène pour enregistrer l’activité de la mouche pendant 5 minutes.
Après l’enregistrement de 5 minutes, anesthésez les mouches dans l’arène et remettez-les dans un nouveau flacon domestique. Ensuite, débarrassez-vous de l’arène. Plus tard, analysez les enregistrements à l’aide du logiciel Ctrax disponible gratuitement. Ce logiciel génère des données de suivi, qui peuvent être exportées dans un format compatible avec un langage programmable, tel que le format MATLAB.
À partir des données, calculez la distance parcourue par image, la distance de marche moyenne pour chaque mouche et la distance moyenne parcourue par mouche. Pour une signification statistique, attendez-vous à tester environ 100 mouches par groupe de traitement.