Rupture des cuticules : une méthode pour collecter l’hémolymphe des larves de drosophile

- Pour commencer, pipetez une goutte de tampon sur un tampon de dissection propre. Ensuite, placez une larve vivante séchée sur la gouttelette. La drosophile, comme les autres arthropodes, a un système circulatoire ouvert dans lequel le cœur pompe l’hémolymphe dans tout le corps, baignant les organes internes. Pour libérer l’hémolymphe, qui est la combinaison du sang et du liquide interstitiel des arthropodes, utilisez des pinces et ouvrez la cuticule, la couverture extérieure semi-rigide des larves.

Ensuite, jetez la carcasse et transférez la solution d’hémolymphe de la plaque de dissection dans une solution tampon réfrigérée dans un tube de microcentrifugation. Enfin, utilisez un hémocytomètre pour compter le nombre d’hémocytes, les cellules de l’hémolymphe, qui ont été collectés. Dans ce protocole, nous collecterons l’hémolymphe des larves de Drosophila melanogaster.

- Commencez la collecte de l’hémolymphe en ajoutant 10 microlitres de 1x PBS dans un tube de microcentrifugation et en plaçant le tube sur de la glace. Ensuite, placez une goutte de 10 microlitres de 1x PBS sur un tampon de dissection propre. Sélectionnez une larve individuelle et séchez-la en la plaçant sur une lin