Dissection du complexe œil-cerveau à partir de pupes de mouches : une méthode pour isoler le tissu rétinien

0 views • 2:52 min • April 30th, 2023

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- Pour commencer, fixez une chrysalide de mouche des fruits dorsale ou arrière, côté vers le haut. Retirez l’opercule ou l’extrémité antérieure de la chrysalide pour exposer la tête de l’animal. Continuez à ouvrir la chrysalide en coupant et en décollant le boyau. Une fois libérée, couvrez la chrysalide disséquée avec du PBS pour éviter la dessiccation. Faites une coupe transversale nette à travers le thorax et retirez la partie postérieure de la carcasse.

Pour exposer le complexe œil-cerveau, qui comprend les deux rétines attachées aux lobes optiques, commencez à déchirer l’épithélium du bord ouvert du thorax et continuez à ouvrir la capsule céphalique progressivement. Ensuite, guidez soigneusement le complexe œil-cerveau loin des restes de la capsule cérébrale.

Dans l’exemple de protocole, nous verrons une démonstration d’une dissection œil-cerveau nymphale utilisée pour isoler des tissus pour diverses analyses en aval.

- Après avoir placé les pupes de drosophile sur un plat de dissection noir, posez un nouveau morceau de ruban adhésif double face sur le plat de dissection en l’éloignant des pupes et utilisez une paire de pinces pour placer soigneusement les pupes côté dorsal vers le haut sur le ruban.

Placez la boîte sous un stéréomicroscope et utilisez une pince pour retirer l’opercule de chaque nymphe. Utilisez des ciseaux de microdissection pour trancher chaque nymphe, en la laissant être ouverte pour révéler la tête, le thorax et le segment abdominal antérieur, et fixez les bords de la boîte nymphale au ruban adhésif double face.

Percez l’abdomen de chaque chrysalide à l’aide d’une pince acérée et retirez la chrysalide de sa nymphe. Placez la chrysalide sur le plat de dissection à l’écart du ruban adhésif et recouvrez la chrysalide de 400 microlitres de PBS glacé. Utilisez des pinces pour saisir chacun d’eux par l’abdomen et utilisez les ciseaux de microdissection pour faire une incision transversale nette à travers le thorax, coupant les pupes en deux.

À l’aide de deux paires de pinces fines, saisissez les bords coupés de chaque épithélium du thorax et déchirez progressivement le thorax et la capsule céphalique, exposant le complexe œil-cerveau dans le tissu adipeux environnant. Ensuite, sans saisir le tissu, utilisez des pinces pour guider chaque complexe œil-cerveau translucide, blanc cassé, en forme d’haltère, loin des restes de la capsule céphalique.

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Last updated: 25 July 2026