C. elegans L’extrusion des gonades : une technique de dissection rapide

- Dans un tube contenant un tampon M9, recueillir jusqu’à 150 vers hermaphrodites au stade de développement souhaité. Éliminez les bactéries des vers en les lavant avec un tampon M9 et en centrifugeant l’échantillon.

Visualisez le tube sous un microscope à dissection lors du retrait du surnageant pour éviter la perte d’échantillon. Transférez les vers dans un plat en verre avec un volume minimal de tampon M9. Ajoutez du lévamisole pour anesthésier les vers.

Localisez la tête du ver et le pharynx, ou intestin antérieur, qui contient deux structures en forme de bulbe. J’ai utilisé deux aiguilles pour couper le ver derrière le pharynx. Assurez-vous de terminer le curage rapidement pour éviter d’affecter les tissus.

Une fois que la cuticule est perturbée, les deux bras gonades sont extrudés ou poussés hors du corps en raison de la pression interne du ver.

Dans cet exemple, nous allons disséquer les gonades de vers adultes pour une analyse par immunofluorescence.

- Choisissez 100 à 150 vers au stade de développement souhaité et collectez-les dans un tube de microcentrifugation de 1,5 millilitre contenant 100 microlitres de tampon M9. Ensuite, remplissez le tube de microcentrifugation avec 900 microlitres supplémentaires de tampon M9 et centrifugez-le à 1 000 fois g pendant 1 minute à température ambiante.

Sous un microscope à dissection, retirez délicatement 900 microlitres du tampon M9. Ensuite, répétez le lavage deux fois de plus pour éliminer la plupart des bactéries attachées.

Ensuite, à l’aide d’une pointe de micropipette de 200 microlitres avec un alésage élargi, transférez les vers dans 100 microlitres de tampon M9 dans un plat de montre en verre à fond plat. Ensuite, ajoutez 1 à 3 microlitres de lévamisole 0,1 molaire dans le plat et remuez-le doucement. Maintenant, attachez deux aiguilles de calibre 25 à deux seringues pour fabriquer un outil de dissection pour chaque main.

Sous un microscope à dissection, placez chaque aiguille sous et au-dessus de chaque ver et faites une coupe fine sur chaque ver près du deuxième bulbe pharyngé à l’aide d’un mouvement de ciseaux. Coupez tous les animaux au moins une fois, tous dans les cinq minutes qui suivent, pour que le lévamisole reste efficace.

- Il est très important que la dissection des animaux dans le plat soit terminée en moins de cinq minutes.

- Dans le cas où une gonade extrudée n’est pas visible, sautez simplement cet animal. Des gonades extrudées appropriées sont visibles ici.