Placage d’ARNi pour l’alimentation de C. elegans : une technique pour induire l’expression de l’ARNdb cible chez E. coli

- Chez C. elegans, l’ARNi peut être induit en nourrissant des vers avec des bactéries qui expriment de l’ARN double brin ou de l’ARNdb à partir d’un plasmide d’ADN recombinant.

Pour commencer, cultivez des E. coli HT115 résistants à la tétracycline transfectés avec le plasmide L4440 pendant la nuit sur des plaques sélectives de gélose LB contenant de la tétracycline et de l’ampicilline, ou son analogue fonctionnel la carbénicille. En plus de l’ADN cible, le plasmide contient un gène de résistance à l’ampicilline. Seules les colonies de bactéries qui héritent du plasmide peuvent se développer en présence de ces antibiotiques.

Ensuite, récoltez les colonies de bactéries et développez-les dans un milieu liquide LB jusqu’à la concentration souhaitée. Pour induire l’expression de l’ARNdb, transférez la solution bactérienne sur des plaques gélosées de gélose contenant de l’IPTG préparées pour les nématodes.

Dans ce système d’expression, IPTG imite le lactose pour inactiver le répresseur lac permettant l’expression de l’ARN polymérase T7. Sur le plasmide, l’expression de l’ADN cible est régulée par deux promoteurs T7 convergents. Par conséquent, des séquences sensorielles et anti-sens son