Dosage de l’olfactomètre à quatre voies : une méthode pour évaluer les réponses des signaux odorants chez la drosophile

- Un olfactomètre à quatre voies est une chambre fermée avec des orifices unidirectionnels à chaque coin, à travers lesquels il peut délivrer jusqu’à quatre odeurs, créant ainsi des quadrants avec des profils d’odeurs distincts. Commencez une expérience en transférant des mouches éveillées dans la chambre. Évitez l’anesthésie, car cela pourrait affecter leur comportement pendant l’expérience.

Exposez les mouches à de l’air pur et observez leurs mouvements pour vous assurer qu’aucun odorant ne contamine l’olfactomètre et n’affecte le comportement des mouches. Ensuite, préparez les odorisants de test dans des flacons séparés et connectez-les à la chambre principale par les ports unidirectionnels. Exposez les mouches aux odorants pendant une période prédéfinie, en supprimant le stimulus une fois l’essai terminé.

Les mouches ont tendance à éviter les quadrants aux odeurs répulsives tout en se déplaçant et en s’installant dans des quadrants aux odeurs attrayantes. Mesurez les réponses comportementales des mouches en suivant leurs positions au fil du temps pendant qu'elles explorent l'olfactomètre.

Dans le protocole suivant, nous utiliserons un olfactomètre à quatre quadrants avec un système de distribution d’air pour analyser le comportement des mouches en réponse au propionate d’éthyle, un odorant répulsif, et au vinaigre de cidre de pomme, qui est attrayant.

- Au moins cinq minutes à l’avance, allumez le régulateur de température et réglez-le sur 25 degrés Celsius. Ensuite, connectez les chambres odorantes à l’arène via un tube en plastique. Vérifiez le débit d’air dans chaque quadrant de l’arène à l’aide d’un débitmètre électronique. Assurez-vous que le contrôle, les odeurs et les flux d’air fonctionnent tous deux à 100 millilitres par minute.

- Les mouches sont très sensibles au flux d’air, et il est essentiel que le flux d’air pour chaque quadrant soit vérifié avant chaque expérience.

- Maintenant, nettoyez l’arène et les plaques de verre avec de l’éthanol à 70 %. Essuyez toutes les pièces deux à trois fois et laissez-les sécher complètement à l’air libre avant de continuer. Ensuite, fixez les plaques de verre à l’arène. Ensuite, transférez les mouches dans l’arène sans anesthésie. En utilisant la gravité, laissez-les entrer par le trou de l’une des plaques de verre, puis couvrez le trou avec un treillis circulaire.

Maintenant, placez l’arène chargée de mouches dans la chambre étanche à la lumière. Ensuite, connectez les quatre flux d’air de contrôle à chaque coin de l’arène. Fermez la porte de la chambre et laissez les mouches s’acclimater au nouvel environnement pendant 10 à 15 minutes.

Après la période d’acclimatation, exécutez une expérience de contrôle de 5 à 10 minutes au cours de laquelle les mouches sont exposées à quatre courants d’air témoins. Il est essentiel d’analyser les données immédiatement. Si les mouches ne sont pas réparties uniformément dans l’arène, l’arène doit être réinitialisée.

- Il est essentiel de tester le comportement des mouches témoins pour purifier l’air. Cela permettra de vérifier rapidement que toutes les conditions d’arrière-plan sont normales. Une fuite de lumière, un déséquilibre de température, une arène inclinée ou une contamination par une odeur peuvent tous causer des problèmes.

- Si nécessaire, jetez les mouches et nettoyez à nouveau l’arène. Si une contamination par un odorant est suspectée, remplacez tous les tubes. Continuez à répéter l’essai de contrôle avec de nouvelles cohortes jusqu’à ce que les animaux ne montrent aucune préférence pour l’un ou l’autre des quatre quadrants. Ensuite, connectez la chambre d’essai odorant à l’installation à l’aide d’une vanne à trois voies, ou reconnectez le tube et exécutez une expérience de test pendant 5 à 10 minutes. Pour des enregistrements expérimentaux plus longs, arrêtez et redémarrez rapidement le programme de suivi toutes les 20 minutes, sinon les fichiers de données seront trop volumineux.

Entre les tests, jetez les mouches, nettoyez l’arène et les plaques de verre avec de l’éthanol à 70 % et remplacez les tubes de connexion. Gardez le flux d’air sec pour rincer continuellement le système. Pour plus d’efficacité, il est bon d’avoir deux arènes pour que le nettoyage puisse être effectué pendant les courses.

- Si plusieurs expériences sont menées le même jour, faites très attention à ce qu’il ne reste aucune odeur dans le système lors d’une exécution précédente. Ce n’est normalement pas un problème avec de faibles concentrations d’odorant ou avec du CO2. Mais pour des stimuli très concentrés, un intervalle allant jusqu’à 24 heures entre les expériences peut être nécessaire.