drosophile Essai du labyrinthe en Y : une méthode pour évaluer les réponses olfactives chez les mouches

- Un labyrinthe en Y se compose d’un connecteur en forme de Y auquel sont reliés trois flacons de mouches par des tubes droits ou coniques. Les mouches se déplacent dans le labyrinthe vers le côté avec le stimulus qu’elles préfèrent. Pour commencer l’expérience, placez un papier de soie avec la solution contenant les produits chimiques volatils dans chaque flacon. Ensuite, connectez-les aux tubes coniques. Les tubes effilés limitent la capacité des mouches à revenir au centre du labyrinthe et ralentissent la diffusion des produits chimiques volatils.

Ensuite, refroidissez les mouches affamées pour les ralentir. N’utilisez pas d’anesthésie chimique, car cela pourrait affecter le résultat du test. Connectez rapidement la fiole avec les mouches réfrigérées au dernier côté du labyrinthe. Laissez les mouches explorer le labyrinthe. Pour réduire toute préférence causée par la lumière vive, effectuez cette étape sous une lumière rouge lointaine, que les mouches ne voient pas. Enfin, comptez les mouches de chaque côté du labyrinthe. Leur emplacement dans le labyrinthe indique leur préférence pour cette odeur chimique volatile.

Dans l’exemple de protocole, nous verrons une configuration du test Y-maze avec des drosophiles de type sauvage.

- Avant d’effectuer le test le lendemain matin, à la fin de la journée, transférez des cohortes de 10 à 20 lignes expérimentales dans des flacons en verre avec de l’humidité fournie par une serviette humide. Les mouches doivent être testées dans les 16 à 18 heures, sinon elles pourraient mourir de dessiccation ou de famine. Le lendemain, assemblez le labyrinthe en Y. Commencez par joindre le connecteur en forme de Y à deux flacons en verre à l’aide de connecteurs en mousse avec des pointes de pipette garnies qui forment les conduits. Leur forme effilée rend ces passages à sens unique.

La troisième branche du « Y » est fixée à un tube de chargement, fabriqué à partir de la grande partie d’une pointe de pipette, et permet le passage de la fiole de chargement au point de choix du labyrinthe. Au-delà de chaque tunnel effilé se trouve un flacon en verre, dont l’un doit être chargé d’un odorisant. Chargez-les sous forme de bolus de 40 microlitres trempés dans des carrés de papier de soie de 28 millimètres. Lequel des deux contient l’odorant doit alterner au hasard.

Pour effectuer le test, refroidissez d’abord brièvement les mouches sur de la glace, afin de ralentir les mouches. Cela devrait être sous une lumière rouge lointaine des ampoules LED et à 25 degrés Celsius. Déposez doucement la cohorte de mouches dans le flacon de chargement et chargez le labyrinthe en Y avec les mouches d’essai. N’utilisez pas d’anesthésie gazeuse.

- Il est vraiment essentiel de transférer les mouches dans le flacon de chargement à la fois rapidement et en douceur. C’est en fait l’étape la plus difficile de cette expérience car les mouches doivent se réveiller rapidement avant la diffusion des odeurs dans le labyrinthe en Y.

- Les mouches doivent être autorisées à explorer le labyrinthe pendant 24 heures, de sorte qu’un nombre maximum de mouches se déplacent vers l’une ou l’autre fiole en verre. Le nombre de mouches présentes dans les différents tubes sert à calculer l’indice olfactif. Des méthodes statistiques standard doivent être appliquées à cette valeur, recueillie à partir du comportement d’un maximum de 10 mouches.

Si les cohortes de 10 mouches ne fournissent pas de résultats cohérents, les essais peuvent être menés avec des cohortes de 20 mouches. Pour nettoyer les composants du labyrinthe, faites-les tremper, démontés, dans RBS 35 MD pendant la nuit. Ensuite, rincez-le à l’eau du robinet et rincez-le un dernier à l’eau DI avant le séchage à l’air.