JoVE Encyclopedia of Experiments
Biologie
0 vues • 2:38 min • April 30th, 2023
- Pour préparer les larves de drosophile à un test de sonde thermique, prélever des animaux du stade de développement souhaité et transférer les larves individuelles sur une plaque d’essai avec une fine pellicule d’eau. L’eau permet aux larves de se déplacer librement sans coller à la surface de la plaque.
Les larves de drosophile détectent des stimuli thermiques nocifs par le biais de neurones sensoriels multidendritiques dans leur épiderme, appelés nocicepteurs. Ceux-ci ne se déclenchent pas tant qu’un certain seuil sensoriel n’est pas atteint, comme des températures élevées potentiellement nocives.
Réglez la sonde de chaleur à une température qui dépassera ce seuil sensoriel et provoquera le déclenchement des nocicepteurs. Appuyez doucement la pointe de la sonde contre la larve pour appliquer de la chaleur. La larve répondra à la température nocive par des comportements thermo-nociceptifs, se retirant de la sonde. Arrêtez-vous lorsque la larve joue un rôle à 360 degrés loin de la sonde de chaleur, ou lorsqu’un temps défini s’est écoulé. Enregistrez le temps de réponse.
Dans l’exemple de protocole, nous verrons une démonstration d’un test de sonde thermique localisé sur des larves de drosophile du troisième stade précoce.
- Tout d’abord, préréglez la température de la sonde thermique au point de consigne souhaité. À l’aide d’un pinceau ou d’une pince, transférez doucement une larve individuelle sur une plate-forme plane, en veillant à ce que la lave soit recouverte d’une fine pellicule d’eau.
- Afin de minimiser la variation de pression, ainsi que d’assurer l’emplacement et l’angle corrects de la sonde thermique, la pratique rend parfait.
- Appuyez doucement la pointe de la sonde contre la larve au niveau du segment A4, en appliquant une légère pression avec la pointe à un angle d’environ 45 degrés entre la sonde et la surface de la larve. La pression doit provoquer une légère indentation à la surface de la larve et sera généralement suffisante pour empêcher la locomotion. Continuez à stimuler la larve jusqu’à ce qu’une réponse de sevrage se manifeste ou jusqu’à ce que le seuil de 20 secondes soit atteint.
Les larves qui répondent montrent généralement d’abord un comportement préliminaire de levage de la tête et de la queue, suivi d’un comportement de retrait de roulement d’au moins 360 degrés. Une fois le comportement de retrait initié, relâchez le contact avec la sonde et enregistrez la latence, c’est-à-dire le temps nécessaire au retrait. Si aucun comportement de retrait n’est observé dans les 20 secondes, la larve ne répond pas.