Essai de gradient de température : une méthode pour tester la préférence de température chez les larves de drosophile

- Pour tester la préférence de température des larves de drosophile, créez un gradient de température en chauffant un côté d’une plaque de dosage en aluminium et en refroidissant l’autre. L’aluminium a une conductivité thermique élevée, ce qui signifie que la chaleur est transférée efficacement, créant un gradient de température linéaire stable. Une fois que le système s’est équilibré, notez les températures sur la plaque dans des zones de température de même taille, puis chargez le centre de la plaque avec des larves propres.

Couvrez l’ensemble du système pour éliminer les interférences de la lumière vive et commencez l’essai. Les larves se répartissent à travers le gradient, en évitant les zones aversives trop chaudes ou trop froides, et s’installent dans des zones de températures favorables. Ce comportement s’appelle la thermotaxie. Pour évaluer la préférence de température des larves, notez le nombre d’animaux dans chaque zone de température.

Dans l’exemple de protocole, nous verrons comment mettre en place un gradient de température unidirectionnel entre 18 et 28 degrés Celsius, et comment les larves sont manipulées pendant le test.

- Pour préparer un gradient unidirectionnel, créez d’abord un environnement ambiant humide pour le test. Placez deux blocs d’aluminium reliés à des bains-marie séparés sur des serviettes en papier humides à 10 centimètres de distance. Les bains-marie doivent être réchauffés à l’avance. Ensuite, faites 100 millilitres d’agarose à 1 % et ajoutez 25 millilitres à chaque plaque de dosage sur une surface plane. Une fois que l’agarose s’est solidifiée, frottez doucement la surface avec une éponge de mélamine pour rendre la surface légèrement grossière.

Ensuite, pour favoriser un transfert de température efficace, remplissez tous les espaces entre les blocs d’aluminium dans les plaques de dosage avec de l’eau fournie par un flacon pulvérisateur. Maintenant, placez les plaques de test sur les blocs d’aluminium et assurez-vous que les démarcations sont à 2 centimètres de chaque bord pour correspondre exactement aux bords des blocs d’aluminium.

Ensuite, vaporisez un film d’eau sur la surface des plaques afin que les gels ne se dessèchent pas. Ensuite, couvrez le système avec une boîte en carton pour réduire l’évaporation et aider à stabiliser la température de la surface du gel. Attendez 5 à 10 minutes pour permettre à la température de s’équilibrer. Ensuite, vérifiez la température de surface sur la plaque à au moins 12 endroits pour vous assurer qu’il y a une température uniforme partout, à 2 degrés Celsius près. Ensuite, replacez le couvercle de la boîte jusqu’à ce que le test soit effectué.

Tout d’abord, retirez la boîte en carton sur le gel et vérifiez rapidement la température de surface du gel. Si la surface est sèche, vaporisez une petite quantité d’eau sur la surface. Si le gel est bon, chargez 100 à 200 larves au centre de chaque plaque à l’aide d’un petit pinceau. Ensuite, placez un couvercle sur chaque plaque de test pour piéger les larves et couvrez l’installation avec une boîte en carton pour éviter l’exposition à la lumière. Le test est maintenant en cours.

Au bout de 10 à 30 minutes, retirez la boîte en carton et le couvercle de la microplaque. Ensuite, photographiez les plaques d’en haut pour enregistrer la position des larves. Placez la boîte au-dessus de l’appareil photo pour éviter les reflets sur la surface du gel. Pour nettoyer la plaque, aspirez toutes les larves là où elles se sont dispersées.

Maintenant, calculez la distribution en pourcentage des larves dans chaque zone à l’aide d’un logiciel d’analyse d’images. Faites des lignes tous les 2 centimètres en fonction des démarcations sur la plaque d’essai et comptez le nombre de larves dans chaque zone.

- Lors du comptage, ignorez les larves réparties dans des régions à 0,5 centimètre de chaque bord. L’épaisseur du gel et les conditions de température ne sont pas uniformes près du bord.