Analyse de la durée de vie : Mesure de la longévité de C. elegans

0 views • 2:26 min • April 30th, 2023

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- Pour mesurer la durée de vie moyenne d’une population de nématodes, commencez par des larves L1 synchronisées au développement dans la zone tampon M9. Déterminez la densité des larves, puis ajoutez-en 50 dans chaque plaque. Préparez au moins trois plaques répétées par condition, ainsi que des plaques de secours.

Laissez ces vers se développer normalement jusqu’à ce qu’ils atteignent le stade L4. Maintenant, vous pouvez ajouter du FUdR aux plaques, ce qui empêchera les vers de produire une descendance. Alternativement, vous devrez déplacer les vers vers de nouvelles plaques chaque jour après le comptage, pour vous assurer que vous ne mesurez que la durée de vie d’une seule génération.

Ensuite, retirez tous les mâles. Cela éliminera les variables du sexe et de l’accouplement de l’expérience. Le lendemain, comptez le nombre de vers vivants sur l’assiette en recherchant un mouvement spontané ou une réponse à un toucher doux. Retirez tous les vers morts et notez les numéros. Comptez quotidiennement les vers survivants jusqu’à ce qu’il n’en reste plus. Dans l’exemple de protocole, nous verrons une démonstration d’un test de durée de vie.

- Chargez les plaques préparées avec 50 animaux L1 chacune. Installez les plaques dans un incubateur à 20 degrés Celsius jusqu’à ce que les embryons se développent jusqu’au stade L4. Le développement normal de L1 à L4 prend environ 40 heures.

Ensuite, pour éviter la production de descendance, ajoutez 160 microlitres de 50x FUdR dans chaque plaque. Ensuite, retirez les mâles, car la durée de vie n’est généralement mesurée qu’avec les hermaphrodites. Une fois terminé, remballez les assiettes dans l’incubateur à 20 degrés Celsius.

Jusqu’à ce que tous les vers soient morts, évaluez leur viabilité sur une base quotidienne. Pour ce faire, touchez doucement chaque nématode immobile sur la tête avec un fil de platine ou un cil. Les animaux non réactifs sont morts et doivent être retirés de la plaque. Prenez note de toute anomalie au cours de cette routine.

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Last updated: 11 July 2026