0 vues • 2:56 min • April 30th, 2023
- Commencez par préparer le composé à tester pour la toxicité et distribuez-le dans les puits d’une plaque de test. Transférez les vers du stade de développement approprié dans chaque puits et démarrez immédiatement une minuterie. Notez tous les vers endommagés et ne les incluez pas dans vos calculs de survie.
Après un temps prédéterminé, comptez le nombre de vers encore vivants dans chaque puits. La lumière vive d’un microscope de dissection ou un léger tapotement sur la plaque devrait faire bouger les vers vivants. Répétez cette observation après chaque intervalle de temps, jusqu’à ce que la plupart des animaux soient morts. Dans le protocole suivant, nous observerons le temps de survie des larves L4 lors de l’exposition au paraquat, un composé qui induit un stress oxydatif.
- Dans cette démonstration, le stress oxydatif sera induit à l’aide de paraquat. Préparez une solution fraîche de paraquat de 100 millimolaires comme décrit dans le texte du protocole d’accompagnement. Le paraquat est un composé dangereux et hautement toxique qui doit être manipulé conformément aux directives appropriées.
Pipette 40 microlitres de la solution de paraquat à chaque puits d’une plaque de 96 puits. Utilisez au moins 12 puits comme répliques de chaque condition testée. À l’aide d’un pic à ver métallique de platine, transférez cinq à huit larves d’animaux L4 dans chaque puits.
Indiquez l’heure de début et l’heure de fin pour chaque condition testée. Placez la plaque à 96 puits à 20 degrés Celsius. Une heure après l’heure de départ, notez les animaux morts et vivants à l’aide d’un microscope à dissection. Secouez doucement l’assiette avant de commencer à compter.
Les vers qui ne bougent pas même après avoir repéré une lumière de haute intensité sont considérés comme morts. Observez la forme des vers, la queue et le mouvement de la tête à fort grossissement pour distinguer les vers morts des vers vivants. Évaluez la survie toutes les heures jusqu’à ce que la plupart des vers soient morts, et répétez ce test au moins trois fois indépendamment.
Pour déterminer le pourcentage de survie pour chaque point temporel, calculez d’abord le nombre total d’animaux par condition en additionnant le nombre total d’animaux transférés dans chaque puits. Ignorez les animaux qui ont été endommagés ou tués lors du transfert. Ensuite, pour chaque point temporel, calculez le nombre total d’animaux morts par condition. Calculez le pourcentage de décès et le pourcentage de survie.