Mesures de la surface musculaire de C. elegans : une méthode standardisée pour quantifier la morphologie des muscles striés

- C. elegans a deux types de muscles. Les muscles sarcomères simples ou non striés comprennent ceux du pharynx et de la vulve. Les multiples sarcomères ou muscles obliquement striés sont des muscles de la paroi corporelle en forme de rhomboïde nommés d’après le motif strié régulier de leurs fibres de myosine.

Ils sont disposés en paires décalées comme quatre faisceaux orientés longitudinalement dans les quatre quadrants du corps du ver vus en coupe transversale. Chaque cellule a de nombreux points d’attache également espacés à l’hypoderme et à la cuticule. Cette disposition aide à traduire les vagues de contractions musculaires en locomotion fluide.

Pour visualiser ces muscles, imagez des vers immobilisés avec de la myosine marquée par GFP transgénique par microscopie confocale fluorescente. Utilisez un logiciel d’analyse pour mesurer la surface d’une cellule musculaire striée et toute lacune dans le motif des fibres de cette cellule. Des lacunes dans l’organisation des fibres musculaires pourraient indiquer une perturbation par la dégradation des fibres ou l’accumulation de débris cellulaires. Calculez le rapport entre la surface de l’espace et la surface totale pour définir le montant de la perturbation. Dans l’exemple de protocole, nous évaluerons quantitativement la morphologie des muscles de la paroi corporelle à l’aide de Fidji.

- Pour mesurer la surface des cellules musculaires, ouvrez l’image dans le logiciel Fiji et utilisez la sélection de polygones pour tracer soigneusement autour d’une seule cellule musculaire oblique. Ajustez la ligne du polygone à la fin en faisant glisser le point d’ancrage pour améliorer le traçage. Accédez à l’onglet Analyser en haut du logiciel et cliquez sur Mesurer pour calculer la zone sélectionnée.

Pour les cellules musculaires avec une région dégénérée ou manquante, tracez la zone manquante à l’aide de l’outil de sélection de polygones et cliquez à nouveau sur Mesurer. S’il y a plusieurs espaces, tracez chacun d’eux séparément. Calculez le rapport entre l’aire de l’espace et l’aire de la cellule entière. Un rapport élevé indique une plus grande étendue de dégénérescence musculaire, et s’il n’y a pas de régions manquantes, le rapport est calculé comme zéro.