0 vues • 2:56 min • April 30th, 2023
- C. elegans est utilisé comme modèle expérimental d’infection par des agents pathogènes intestinaux qui causent des maladies, en partie, en perturbant la barrière intestinale, augmentant ainsi sa perméabilité. Pour quantifier l’intégrité de la barrière après une exposition à une bactérie ou à un composé chimique d’intérêt, prélevez les vers en les lavant de leurs assiettes.
Ensuite, placez ces vers sur des plaques de gélose avec des aliments étiquetés composés d’E. coli tué par la chaleur mélangé à du FITC-dextran, un polysaccharide de haut poids moléculaire avec une étiquette fluorescente.
Laissez les vers manger les bactéries étiquetées. Ceux qui ont des barrières intestinales intactes élimineront rapidement la nourriture, tandis que chez les vers aux intestins plus perméables, le marqueur fluorescent pénétrera au-delà de la lumière de l’organe.
Transférez les vers dans une solution de formaldéhyde pour fixer les animaux. Après 1 à 2 minutes, remplacez le formaldéhyde par le support de montage.
Enfin, imagez les vers par microscopie fluorescente. Notez que les granules intestinaux de C. elegans sont autofluorescents, il y aura donc un signal de fond. Mais dans l’ensemble, une fl
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