Injection dans la veine porte : une méthode pour étudier les métastases cancéreuses au foie

Le foie est un site métastatique secondaire pour la plupart des cancers. Pour étudier les métastases, nous pouvons injecter des cellules cancéreuses dans la veine porte, qui transporte le sang d’autres parties du corps vers le foie.

Commencez par placer une souris anesthésiée en position couchée. Stérilisez la zone abdominale nue avec de la chlorhexidine et de l’alcool. À l'aide de microciseaux, faites une incision entre les côtes et la quatrième glande mammaire du côté gauche de l'animal sans endommager les organes internes.

Placez un tampon de gaze imbibé de solution saline stérile près de l’incision. Tirez doucement l’intestin vers l’extérieur à l’aide d’un coton-tige stérile pour révéler la veine porte, et placez-le sur la gaze. Couvrez les organes avec la compresse de gaze pour éviter le dessèchement. Insérez l’aiguille de la seringue contenant des cellules cancéreuses marquées par fluorescence dans la veine porte et injectez lentement les cellules. Attendez quelques secondes pour éviter le reflux des cellules et retirez soigneusement l’aiguille.

Après l’injection, les cellules cancéreuses se déplacent généralement dans la sinusoïde et envahissent les hépatocytes près de la triade porte pour métastaser. Remettez les organes dans la cavité abdominale et suturez l’incision. Dans l’exemple de protocole, nous allons effectuer une injection dans la veine porte pour étudier les métastases du cancer du sein au foie.

Avant de commencer la procédure, essuyez toutes les surfaces de la zone chirurgicale avec de l’eau de Javel à 10 %. Une heure avant les injections, traitez des souris femelles BALB/c âgées de 8 à 15 semaines avec 100 microlitres d’analgésie par voie sous-cutanée pour la gestion de la douleur. Appliquez de la pommade sur les yeux de l'animal. Ensuite, placez la souris en position couchée et confirmez le niveau de sédation approprié par pincement des orteils.

Ensuite, désinfectez les zones chirurgicales et environnantes de l’animal, y compris la queue, avec trois lingettes stériles imbibées de chlorhexidine à 2 % et deux lingettes imbibées d’alcool en alternance. Après la dernière lingette à la chlorhexidine, utilisez un scalpel stérile pour faire une incision de 1 pouce dans la peau entre les plaines médiane et sagittale du côté gauche de la bouche, en commençant juste en dessous des côtes et en terminant au-dessus de la quatrième tétine de la glande mammaire inguinale, suivie d’une incision similaire d’un pouce à travers le péritoine.

Maintenant, pipetez les cellules tumorales de haut en bas plusieurs fois pour remettre la solution cellulaire en suspension, et chargez une seringue à aiguille amovible de 25 microlitres, équipée d’une aiguille de calibre 32 avec 10 microlitres de cellules. Appuyez sur le piston jusqu’à ce que les cellules soient à la pointe de l’aiguille et que le piston soit au volume approprié pour l’injection. Essuyez l’extérieur de l’aiguille chargée avec un tampon d’alcool stérile pour éliminer toutes les cellules tumorales externes, en prenant soin d’éviter les piqûres d’aiguille.

Ensuite, en tenant la peau et la muqueuse péritonéale du côté médian de l’incision avec la pince, utilisez un coton-tige stérile pour déplacer soigneusement le gros et l’intestin grêle sur une gaze stérile imbibée de sérum physiologique. Couvrez les organes internes dans la gaze imbibée de solution saline pour maintenir l’humidité interne et la stérilité. Lorsque la veine porte est visible, demandez à un assistant de tenir doucement les intestins à l’écart pour exposer la veine porte avec le coton-tige stérile et d’insérer l’aiguille de 3 à 5 millimètres dans la veine porte, à environ 10 millimètres sous le foie à un angle de moins de 5 degrés, côté biseau vers le haut.

Injectez lentement tout le volume des cellules tumorales, permettant au sang de circuler au-delà de la tête de l’aiguille pendant plusieurs secondes pour éviter un reflux des cellules tumorales hors de la veine.

Comme la visualisation, l’accès et l’injection dans la veine porte sont essentiels, prenez le temps de vous assurer que le positionnement de la veine porte par rapport à l’aiguille est satisfaisant avant de tenter l’injection.

Lorsque toutes les cellules ont été injectées, retirez l’aiguille tout en appliquant simultanément une légère pression sur la veine avec un applicateur stérile à embout de coton. Ensuite, utilisez un nouvel applicateur en coton stérile pour tenir un morceau de gaze hémostatique de 0,5 à 1 centimètre carré sur le site d’injection.

Après cinq minutes, soulevez délicatement la gaze pour évaluer la fermeture de la veine. Lorsque le flux sanguin a complètement cessé, retirez la gaze et ramenez les intestins dans la cavité abdominale. À l’aide d’un motif de suture simple, continu ou interrompu, fermez la muqueuse péritonéale avec une suture stérile 4-0 en vicryl et effilez-la.

Après avoir fermé la peau de la même manière, injectez 100 microlitres d’anesthésique local le long du site d’incision, suivi d’une administration sous-cutanée de 0,5 millilitre de sérum physiologique.