XTT Assay : un test colorimétrique pour évaluer la viabilité cellulaire et l’activité mitochondriale

- Les ondes ultrasonores à basse fréquence conduisent à la lyse sélective des cellules leucémiques humaines et le test XTT aide à déterminer le degré de ces dommages. Le test fonctionne sur le principe que les enzymes mitochondriales des cellules saines convertissent un colorant XTT jaune en un composé orange appelé formazan. Pour commencer le test, traitez les cellules avec de la méthylbêta-cyclodextrine, un agent appauvrissant le cholestérol, puis sonicez les cellules à faible puissance pour induire des dommages cellulaires.

Centrifuger pour granuler les cellules et ajouter un nouveau milieu de croissance cellulaire à la pastille. Ensemencez les cellules à la concentration souhaitée dans une microplaque multi-puits et incubez-la pendant la nuit. Maintenant, ajoutez la solution XTT activée aux cellules et incubez jusqu'à ce que la couleur orange se développe dans les puits de la microplaque. Placez la plaque dans un spectrophotomètre. Mesurez l’absorbance à 450 à 500 nanomètres puis à 630 à 690 nanomètres. Soustrayez les deux valeurs pour obtenir des résultats précis. La valeur plus élevée de l’absorbance dans le test XTT indique une activité plus élevée des enzymes mitochondriale