Encyclopédie des expériences JoVE
Recherche sur le cancer
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- Commencer avec une suspension de cellules leucémiques contenant la densité cellulaire désirée. Centrifugez et mettez en suspension les cellules dans un milieu de culture contenant du sérum. L’ajout de sérum favorise la croissance cellulaire continue et les cellules se déplacent à travers les différentes phases du cycle cellulaire. Diluez les cellules dans une solution de marquage à la bromodéoxyuridine, ou BrdU, et cultivez-les dans des conditions physiologiques pendant la durée requise.
Les cellules en phase de synthèse ou en phase S absorbent BrdU - un analogue de la thymidine - qui remplace la thymidine pendant le processus de réplication de l’ADN. Centrifugez les cellules pour éliminer l’excès de BrdU et remettez les cellules en suspension dans un milieu approprié. Transférez les cellules dans une plaque à plusieurs puits. Permettre aux cellules de se développer dans des conditions physiologiques pendant différentes périodes.
À différentes périodes, les cellules progressent à travers le reste des phases S, G2, mitose et G1 et entrent dans le cycle cellulaire suivant, ce qui permet d’estimer la prolifération cellulaire. Effectuez une coloration des anticorps pour marquer BrdU
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