Coloration par immunofluorescence BrdU : une technique pour identifier les cellules dans différentes phases du cycle cellulaire

- La bromodéoxyuridine ou BrdU est un analogue nucléosidique synthétique de la thymidine. Au cours de la phase de synthèse du cycle cellulaire, BrdU substitue la thymidine et s’intègre dans l’ADN nouvellement synthétisé. Le BrdU incorporé permet de suivre la progression du cycle cellulaire. Pour détecter le BrdU incorporé, il faut d’abord fixer et perméabiliser les cellules pour les rendre perméables.

Ensuite, traitez les cellules avec l’enzyme DNAse pour cliver les brins d’ADN et exposer le BrdU incorporé. Par la suite, ajoutez un anticorps anti-BrdU marqué fluorescent approprié. L’anticorps pénètre dans le noyau et se lie facilement à la BrdU exposée présente dans l’ADN.

De plus, traitez les cellules avec un colorant fluorescent approprié pour se lier à l’ADN. Le colorant se lie à l’ADN, ce qui permet de quantifier le contenu total en ADN. Utilisez la cytométrie en flux pour détecter la fluorescence à partir du BrdU marqué et de l’ADN.

Les intensités de fluorescence de l’ADN marqué différencient les cellules dans différentes phases du cycle cellulaire en fonction de la variation de la teneur totale en ADN. Le signal fluorescent de BrdU identifie la position actuelle du cycle cell