Co-culture 2D de cellules leucémiques avec des BMSC : une méthode pour obtenir des sous-populations de cellules leucémiques

- Dans un système de co-culture 2D, plusieurs types de cellules sont cultivés ensemble dans des plaques de culture plates. Ce système de culture facilite l’étude des interactions cellulaires et du comportement in vitro. Pour établir une co-culture de cellules leucémiques avec des cellules stromales de moelle osseuse, ou BMSC, ajoutez une suspension de cellules leucémiques à une culture monocouche adhérente de BMSC. Incuber la plaque dans des conditions de culture appropriées. Maintenez la co-culture en remplaçant 90 % du milieu de culture tous les quatre jours.

Au cours de cette co-culture 2D, les cellules leucémiques interagissent avec les BMSC et se localisent dans des régions distinctes de la culture, formant trois sous-populations. La microscopie à contraste de phase permet de différencier visuellement les trois sous-populations. Le premier groupe de cellules leucémiques qui apparaît flottant librement dans le milieu est classé comme cellules en suspension. Le deuxième groupe de cellules leucémiques qui ont adhéré à la surface de la monocouche BMSC apparaît brillant et est classé comme cellules à brillance de phase.

Le troisième groupe de cellules leucémiques qui ont migré sous la monocouche apparaît sombre et est classé comme cellules à atténuation de phase. Dans le protocole suivant, nous effectuons la co-culture de cellules de leucémie lymphoblastique aiguë, ou LAL, avec des cellules stromales de la moelle osseuse humaine.

- Commencez par ensemencer 5 à 20 fois 10 à 10 cellules leucémiques dans 10 millilitres de milieu de culture spécifique à la tumeur sur une plaque de 100 millimètres de cellules stromales confluentes de la moelle osseuse ou d’ostéoblastes. Tous les quatre jours, inclinez la plaque sur le côté et aspirez tout sauf 1 millilitre du fluide, en prenant soin de ne pas perturber la couche cellulaire adhérente. Ensuite, ajoutez soigneusement 9 millilitres de milieu de culture cellulaire leucémique frais goutte à goutte dans le coin de la plaque sur le côté pour assurer une perturbation minimale des cellules adhérentes.

Après le 12e jour de co-culture, pipetez doucement le milieu de culture de haut en bas sur la plaque environ 5 à 10 fois pour recueillir les cellules leucémiques flottantes, puis transférez les cellules dans un tube conique de 15 millilitres. Ensuite, réensemencez les cellules sur une nouvelle plaque de 80 à 90 % de cellules stromales confluentes de la moelle osseuse ou d’ostéoblastes, comme nous venons de le démontrer. Au jour 4, trois sous-populations de cellules leucémiques se seront formées, avec les cellules leucémiques en suspension flottant librement dans le milieu, les cellules leucémiques à phase brillante adhérent à la surface de la monocouche cellulaire adhérente et les cellules leucémiques à faible phase migrent sous la monocouche.