Tri des cellules de leucémie sur colonne G-10 : une méthode pour purifier les cellules de leucémie lymphoblastique aiguë à partir de cellules stromales de la moelle osseuse

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- Pour commencer, ajoutez de la trypsine à une plaque contenant des cellules leucémiques co-cultivées avec des cellules stromales de la moelle osseuse pour la dissociation cellulaire. Centrifugez et remettez en suspension la pastille à l’aide d’un milieu préchauffé pour maintenir la viabilité cellulaire. La colonne G-10 contient des billes de dextran réticulées qui gonflent dans l’eau pour former une matrice de gel.

Équilibrez la colonne G-10 avec un média préchauffé pour remplir l’espace entre les billes, assurant ainsi une élusion lente du média de la colonne. Maintenez une température appropriée dans la colonne pour éviter la formation de bulles d’air. Chargez lentement le mélange de cellules sur les billes de gel dans la colonne G-10. Incuber les cellules sur la colonne G-10 à température ambiante pendant la durée souhaitée. En fonction des caractéristiques et de la taille de la surface cellulaire, les billes de gel restreignent préférentiellement les cellules stromales plus grandes de la moelle osseuse, permettant la séparation des cellules leucémiques.

Ajoutez un milieu préchauffé dans la colonne et récupérez la suspension des cellules leucémiques. Centrifugez la suspension cellulaire et remettez la pastille en suspension dans un tampon approprié. Utiliser la population pure de cellules leucémiques pour une analyse plus approfondie. Dans l’exemple suivant, nous allons séparer une population pure de cellules leucémiques de la co-culture stromale à l’aide de la colonne G-10.

- Avec le robinet complètement fermé pour chaque sous-population, utilisez une pipette de 1000 microlitres pour ajouter tout le volume de 1 millilitre de cellules, goutte à goutte, sur le dessus de l’une des colonnes G-10 préparées, en vous assurant que les cellules restent au-dessus ou à l’intérieur de la pastille G-10. Laissez les cellules incuber sur la pastille G-10 pendant 20 minutes à température ambiante. Ensuite, ajoutez 1 à 3 millilitres de milieu frais et préchauffé à la colonne et ouvrez le robinet d’arrêt pour que le milieu sorte lentement des colonnes dans le sens de la goutte.

Continuez à ajouter du milieu préchauffé aux colonnes par incréments de 1 à 2 millilitres. Lorsqu’un total de 15 à 20 millilitres de cellules leucémiques a été prélevé, fermez le robinet d’arrêt et bouchez le tube de prélèvement. Ensuite, faites tourner les cellules et remettez la pastille en suspension dans le tampon d’analyse en aval approprié.

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Last updated: 25 July 2026