Prélèvement sanguin rétro-orbitaire : méthode d’isolement de cellules mononucléées du sinus rétro-orbitaire d’une souris

- Tout d’abord, tenez une souris anesthésiée par le cou et faites saillir l’œil. Insérez un tube capillaire fin dans le canthus médial de l’œil. Permettez au sang de circuler par capillarité dans un tube. Transférez le sang dans un tube recouvert d’EDTA et maintenez-le sur de la glace. L’EDTA lie les ions calcium, empêchant la coagulation du sang. Une température plus basse réduit l’activité glycolytique des cellules et les risques de contamination microbienne.

Ensuite, diluez le sang avec un tampon contenant de l’EDTA et mélangez bien. Ajoutez soigneusement une couche d’une solution de séparation appropriée au fond, sans déranger le sang. Centrifuger la suspension. Le polymère dans la solution de séparation agrège les globules rouges et les sédiments au fond. Les cellules mononucléées et les plaquettes, étant plus légères que le polymère, se déposent au-dessus du gradient polymère.

Retirez la couche supérieure contenant le plasma et récupérez l’anneau blanc opaque contenant les cellules mononucléaires. Diluez les cellules à l’aide de PBS et d’une centrifugeuse pour éliminer le plasma et les plaquettes résiduels. Utilisez les cellules mononucléées isolées pour une analyse plus appr