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0 vues • 3:12 min • April 30th, 2023
- La coloration May-Grunwald Giemsa, ou coloration MGG, est une procédure en deux étapes pour la coloration différentielle des cellules de la moelle osseuse, ou BMC. Pour commencer la coloration, obtenez un frottis monocouche concentré de BMC sur une lame de verre. Laissez le frottis sécher à l’air. Traitez d’abord les cellules avec un colorant May-Grunwald contenant de l’éosine et du bleu de méthylène dissous dans du méthanol.
Le solvant méthanol fixe d’abord les cellules. Le bleu de méthylène, un colorant basique avec une charge positive nette, colore les composants cellulaires acides comme les acides nucléiques. L’éosine, un colorant acide avec une charge négative nette, colore les composants cellulaires de base comme les protéines cationiques cytoplasmiques. Traitez les cellules avec une solution tampon de pH 6,8 pour permettre au colorant de précipiter et de bien se lier aux matériaux cellulaires.
De plus, traitez les cellules avec la coloration Giemsa, contenant également des colorants acides et basiques, pour améliorer l’effet global de la coloration. Les colorants basiques, l'azur et le bleu de méthylène, intensifient la coloration des composants acides, tandis que le colorant acide, l'éosine, augmente la coloration des composants basiques.
Au microscope, les érythrocytes apparaissent brun rosé et les plaquettes sous forme de petits points violets. Les granulocytes présentent un noyau multilobé bleu-violet et un cytoplasme granulé rouge. Les agranulocytes apparaissent bleu clair avec un gros noyau rose-violet. Dans le protocole suivant, nous montrons la coloration MGG des cellules de la moelle osseuse.
- Pour préparer les cellules de la moelle osseuse à la coloration, placez d’abord les lames dans des chambres jetables avec des cartes filtrantes pré-attachées et placez les chambres dans une cytocentrifugeuse. Ajoutez 100 microlitres de tampon FACS dans chaque chambre de carte filtrante et centrifugez brièvement les lames. À la fin de l’essorage, ajoutez 100 microlitres de cellules dans chaque chambre et centrifugez les cellules.
Ensuite, retirez soigneusement les lames des chambres pour les faire sécher à l’air. Pour colorer les cellules de la moelle osseuse, plongez les lames dans un bocal Coplin contenant la solution de May-Grunwald pendant 5 minutes. Ensuite, transférez les lames dans un bocal de solution tampon avec un pH de 6,8 pendant 1 minute. Transférez ensuite les lames dans la solution Giemsa R pendant 10 minutes, puis rincez-les pendant 10 secondes avec de l’eau au pH neutre.
Après le lavage, laissez les lames sécher à l’air libre et appliquez une goutte de support de montage sur chaque échantillon. Ensuite, placez un bord d’un verre de protection sur la lame et abaissez soigneusement le verre de protection sur les cellules, en appuyant doucement pour éliminer les bulles d’air.