Centrifugation à gradient de densité : une méthode pour isoler les cellules de la LLC du sang périphérique

- Chez les patients atteints de leucémie lymphoïde chronique, ou LLC, les lymphocytes B augmentent considérablement dans la moelle osseuse et le sang. Pour isoler ces cellules de la LLC à partir d’un échantillon de sang, il faut d’abord traiter l’échantillon avec un cocktail d’enrichissement en lymphocytes B humains qui sépare les lymphocytes B en utilisant la sélection négative. Les anticorps du cocktail reconnaissent et réticulent spécifiquement les antigènes exprimés par les cellules non B et les érythrocytes, formant des complexes denses.

Ensuite, superposez l’échantillon sur un milieu à gradient de densité ayant une densité optimale pour l’isolement des lymphocytes. Lors de la centrifugation ultérieure, les différents composants sanguins se séparent en fonction des variations de leurs densités par rapport au milieu à gradient. Les complexes de globules rouges non B avec des densités plus élevées se déposent à travers le milieu, formant une pastille. La fraction plasmatique la moins dense forme la couche supérieure. Les cellules de la LLC moins denses forment une couche blanche à l’interface plasma-milieu de densité.

Transférez délicatement la couche blanche dans un tube frais.